血液系統(tǒng)惡性腫瘤研究范文

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摘要：

細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞（CIK）細(xì)胞是通過(guò)采集患者外周血的單核細(xì)胞，在體外經(jīng)多種細(xì)胞因子誘導(dǎo)和培養(yǎng)后獲得的一類(lèi)具有非主要組織相容性抗原限制性（MHC）殺瘤活性的免疫細(xì)胞，同時(shí)表達(dá)CD3和CD56這兩種膜蛋白分子，具有T淋巴細(xì)胞的強(qiáng)大抗瘤活性和NK細(xì)胞的非MHC限制性殺瘤的優(yōu)點(diǎn)。因其易獲得，體外高擴(kuò)增率以及非MHC限制性等優(yōu)點(diǎn)，使之成為腫瘤獲得性生物免疫治療中的熱點(diǎn)。在體外及動(dòng)物試驗(yàn)中，CIK細(xì)胞對(duì)實(shí)體瘤和血液系統(tǒng)惡性腫瘤同樣具有有效的細(xì)胞毒性作用，臨床研究顯示，CIK細(xì)胞免疫治療對(duì)于腫瘤患者，甚至是晚期腫瘤患者療效肯定，與傳統(tǒng)治療方法具有協(xié)同抗瘤作用。本文將討論CIK免疫治療在血液系統(tǒng)惡性腫瘤中的研究進(jìn)展及未來(lái)發(fā)展趨勢(shì)，并將最新的重點(diǎn)研究成果作一回顧。總體來(lái)講，研究顯示，CIK細(xì)胞在控制血液系統(tǒng)腫瘤生長(zhǎng)、延長(zhǎng)生存時(shí)間以及改善生活質(zhì)量上具有肯定療效。然而，目前為止，仍缺乏明確的能夠用于臨床治療的應(yīng)用規(guī)范。

主題詞：

CIK細(xì)胞；臨床試驗(yàn)；免疫治療；血液系統(tǒng)惡性腫瘤

在過(guò)去的十幾年里，血液系統(tǒng)惡性腫瘤的治療取得重大進(jìn)展，然而遠(yuǎn)期療效不盡人意，大部分患者因放化療的不良反應(yīng)而痛苦不堪，特別是最易罹患血液惡性腫瘤的老年患者。治療相關(guān)的不良反應(yīng)導(dǎo)致化療藥物減量甚至停藥，導(dǎo)致病情加重惡化［1］。因此，必須尋求其他有效的、不良反應(yīng)少的治療方法。近年來(lái)，獲得性免疫治療作為一種新的方式，在腫瘤治療中顯示出突出作用，成為一種輔助治療甚至是替代性治療方式。通過(guò)激活機(jī)體自身免疫系統(tǒng)觸發(fā)機(jī)體抗瘤反應(yīng)，調(diào)動(dòng)機(jī)體自身機(jī)制更好地識(shí)別并殺傷腫瘤細(xì)胞。在眾多的生物免疫治療方法中，獲得性細(xì)胞免疫治療利用CIK細(xì)胞重建機(jī)體免疫機(jī)制，療效可靠。在首批體外及動(dòng)物試驗(yàn)中，CIK細(xì)胞對(duì)轉(zhuǎn)染的造血細(xì)胞顯示出很高的細(xì)胞毒效應(yīng)［2，3］。最新的臨床試驗(yàn)文章顯示，CIK免疫治療對(duì)不同類(lèi)型腫瘤，尤其是實(shí)體瘤患者具有明確的抗瘤效應(yīng)并顯著提高無(wú)進(jìn)展生存及總生存率，無(wú)明顯不良反應(yīng)，患者耐受性好，可重建晚期腫瘤患者的免疫系統(tǒng)，提高生活質(zhì)量［4~8］。CIK細(xì)胞較其他免疫細(xì)胞擴(kuò)增迅速，具有更強(qiáng)的抗瘤活性［3，9］，可通過(guò)分離人外周血單核細(xì)胞（PBMC），在體外與IFN-γ、抗CD3抗體及重組人白介素-12共培養(yǎng)獲得。通過(guò)體外培養(yǎng)，CD56-和CD56+兩種主要的CD3+T細(xì)胞被分離，兩者具體比例依賴(lài)于培養(yǎng)過(guò)程的具體操作。其中CD3+CD56+細(xì)胞表型被認(rèn)為具有超強(qiáng)的抗瘤能力。這類(lèi)細(xì)胞同時(shí)具有T淋巴細(xì)胞的強(qiáng)大抗瘤活性和NK細(xì)胞的非MHC限制性殺瘤的優(yōu)點(diǎn)，對(duì)多種腫瘤細(xì)胞具有細(xì)胞毒作用。而這些CD3+CD56+細(xì)胞并不是來(lái)源于NK細(xì)胞，而是來(lái)源于雖通過(guò)HLA限制性但仍然被殘存的同種異體反應(yīng)所排斥的CD3+CD56-細(xì)胞［3，11，12］。

1作用機(jī)制

CIK細(xì)胞的抗瘤活性是穿孔素介導(dǎo)的，依賴(lài)于細(xì)胞間直接接觸，通過(guò)NKG2D細(xì)胞表面受體發(fā)揮作用，用NKG2D抗體或siRNA阻斷NKG2D后，CIK細(xì)胞喪失了不依賴(lài)TCR的抗腫瘤細(xì)胞毒性作用。大多數(shù)CIK表達(dá)NKG2D，它的活性與一個(gè)10kDa的銜接分子DNAX活性蛋白相關(guān)，在高濃度IL-2的作用下，CIK細(xì)胞中DNAX蛋白表達(dá)上調(diào)，而與CD3+CD5+細(xì)胞比例無(wú)關(guān)。所有實(shí)體瘤及血液系統(tǒng)腫瘤高表達(dá)DNAX配體，典型的有MHCⅠ類(lèi)鏈相關(guān)分子(MIC)A/B以及UL16結(jié)合蛋白家族成員［14~16］。CIK細(xì)胞同樣表達(dá)其他一些活化的NK細(xì)胞受體，例如DNAM-1、NKp30、NKp44和NKp46，這些受體被認(rèn)為與腫瘤細(xì)胞識(shí)別有關(guān)，但在CIK細(xì)胞抗瘤中的作用知之甚少。最終分化的CIK細(xì)胞同時(shí)表達(dá)CD45RA+、CCr7-、CD11a+、CD62-/+、CD27+、CD28-，分化后期的CD3+CD56+細(xì)胞較早期的CD3+CD56-細(xì)胞擁有更多的效應(yīng)特征［11，17］。CD56在CIK的細(xì)胞毒效應(yīng)中發(fā)揮重要作用，抗CD56的單克隆抗體GPR165可以顯著減少CIK對(duì)三種CD56+造血系統(tǒng)腫瘤細(xì)胞(AML-NS8、NB4和KCL22)的裂解作用。而對(duì)CD56-的腫瘤細(xì)胞(K562、REH和MOLT-4)無(wú)影響。通過(guò)siRNA敲除CD56的CIK細(xì)胞對(duì)CD56+的腫瘤細(xì)胞效應(yīng)降低，而用慢病毒的短發(fā)卡RNA轉(zhuǎn)染腫瘤細(xì)胞的CD56，可以顯著降低腫瘤細(xì)胞對(duì)CIK的敏感性［18］。研究發(fā)現(xiàn)臍血來(lái)源和外周血來(lái)源的CIK細(xì)胞通過(guò)不同的通路對(duì)B細(xì)胞性ALL具有細(xì)胞毒性效應(yīng)，如NKG2D通路和TRAIL通路，而不同的作用機(jī)理不僅取決于不同來(lái)源的CIK細(xì)胞，同時(shí)也取決于不同類(lèi)型的腫瘤細(xì)胞［19］。多種過(guò)繼免疫治療使用不同的殺傷細(xì)胞，例如，標(biāo)準(zhǔn)的淋巴細(xì)胞因子活化的殺傷細(xì)胞（LAK）、腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)的淋巴細(xì)胞（TILs），這兩類(lèi)因?yàn)榈蛿U(kuò)增效率和抗瘤活性，臨床試驗(yàn)中療效有限［20］。研究發(fā)現(xiàn)，盡管LAK細(xì)胞與CIK細(xì)胞制備方法相似，都具有非MHC限制性殺瘤活性，但相比而言，CIK具有更高的擴(kuò)增倍率以及更特異的殺傷腫瘤細(xì)胞的能力［9］。因此，根據(jù)一系列實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，CIK細(xì)胞因其本身超強(qiáng)的細(xì)胞毒性特點(diǎn)，必定在未來(lái)的免疫治療中發(fā)揮重要作用。因此，大量針對(duì)CIK抗瘤作用的臨床研究如火如荼。本文將介紹和回顧C(jī)IK細(xì)胞在血液系統(tǒng)腫瘤中的研究成果。

2體外培養(yǎng)擴(kuò)增方法的改進(jìn)

1991年，Schmidt-Wolf等［2］創(chuàng)建了一套標(biāo)準(zhǔn)的CIK細(xì)胞分離培養(yǎng)程序并被沿用至今。根據(jù)這套程序，CIK細(xì)胞能夠用PBMCs在體外加入IL-2培養(yǎng)而成。然而，時(shí)至今日，CIK細(xì)胞的分離培養(yǎng)方法仍在不斷地被改進(jìn)，研究者們?cè)噲D通過(guò)各種方法提高細(xì)胞的增殖數(shù)量和腫瘤特異性細(xì)胞毒性。特別值得一提的是加入了除IL-2以外的其他細(xì)胞因子，另一研究熱點(diǎn)在于在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中如何抑制調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Tregs）活性，Tregs被認(rèn)為可反向抑制T細(xì)胞殺傷活性，抑制Tregs活性認(rèn)為可以增強(qiáng)T細(xì)胞毒性［21］。Lin等［22］發(fā)現(xiàn)每2~3天加入IL-16能夠增加CIK細(xì)胞的增殖率及增強(qiáng)細(xì)胞毒活性。CD3+CD56+效應(yīng)細(xì)胞數(shù)量同步增加，提高體內(nèi)細(xì)胞毒性殺傷效能。研究發(fā)現(xiàn)，Tregs細(xì)胞顯著減少，因此認(rèn)為IL-6能夠抑制Tregs的免疫抑制作用。在Heninger等［23］的近期研究中報(bào)道了類(lèi)似的結(jié)果：加入IL-7較單獨(dú)IL-2同樣可以增加CIK細(xì)胞的增殖活性及細(xì)胞毒性。有趣的是，同樣觀(guān)察到Tregs細(xì)胞的被抑制現(xiàn)象。IL-7轉(zhuǎn)染的CIK細(xì)胞具有相同特性［24］。而對(duì)于血液系統(tǒng)惡性腫瘤而言，IL-15取代了IL-2的位置，用IL-15刺激增生的CIK細(xì)胞對(duì)急性淋巴細(xì)胞白血病和淋巴瘤細(xì)胞、急性髓性白血病及特異性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞顯示出較IL-2更強(qiáng)的細(xì)胞毒活性［25］。另一項(xiàng)研究中，用IL-15刺激培養(yǎng)的CIKCD3+CD56+細(xì)胞數(shù)量大幅增多同時(shí)伴有Tregs的功能抑制并發(fā)現(xiàn)IL-35的減少［26］。在一項(xiàng)針對(duì)清除血液系統(tǒng)殘留腫瘤細(xì)胞的研究中，Deng等［27］發(fā)現(xiàn)抗CD20單克隆抗體可通過(guò)STAT通路促進(jìn)CIK細(xì)胞的增殖，并通過(guò)MAPK/ERK信號(hào)通路增強(qiáng)CIK細(xì)胞的抗凋亡能力。進(jìn)一步的研究顯示，與IL-21共培養(yǎng)可增加IL-21受體、穿孔素、端粒酶B、FasLigand、γ-IFN以及TNF-α的表達(dá)，CD3+CD56+細(xì)胞比例增多，但平均增殖率無(wú)顯著變化［28］。說(shuō)明IL-21也可作為CIK細(xì)胞的共培養(yǎng)因子。更多的證據(jù)顯示，與DC細(xì)胞共培養(yǎng)能夠增加抗腫瘤細(xì)胞毒性，減少Tregs細(xì)胞數(shù)量，并且DC-CIK能夠增加CD3+CD56+細(xì)胞的數(shù)量和比例，增加IL-12的分泌［26~30］。

3同種異體免疫反應(yīng)

在血液系統(tǒng)惡性腫瘤中，CIK細(xì)胞的同種異體活性非常重要。因?yàn)閷?duì)于很多血液系統(tǒng)惡性腫瘤患者而言，異體造血干細(xì)胞移植是唯一的治愈希望。異基因造血干細(xì)胞移植中，起主要效應(yīng)的是供體淋巴細(xì)胞移植后產(chǎn)生的移植物抗腫瘤效應(yīng)（graftversustumor，GVT）。GVT效應(yīng)也可用于供體淋巴細(xì)胞輸注（donorlymphocyteinfusion，DLI）后疾病復(fù)發(fā)的治療。而另一方面，供體淋巴細(xì)胞同樣可以引起嚴(yán)重的移植物抗宿主反應(yīng)（graftversushostdiseases，GVHD）。CIK細(xì)胞在出現(xiàn)GVHD時(shí)可以通過(guò)免疫屏障發(fā)揮重要作用。在一個(gè)鼠模型中，CIK細(xì)胞通過(guò)MHC屏障成功移植并進(jìn)入荷瘤小鼠體內(nèi)后，顯示出良好的GVT效應(yīng)以及零GVHD反應(yīng)［34］。這個(gè)研究小組在另一個(gè)小鼠模型中發(fā)現(xiàn)CIK細(xì)胞分泌高水平IFN-γ，能夠降低GVH活性，而從IFN-γ敲除動(dòng)物模型中擴(kuò)增的CIK細(xì)胞會(huì)加劇GVHD［35］。有趣的是，CIK的不同細(xì)胞亞群發(fā)揮不同作用，或者具有抗瘤活性，或者導(dǎo)致異體免疫反應(yīng)。具有抗瘤活性的主要為CD3+CD56+細(xì)胞，而CD3+CD56-細(xì)胞則主要與異原性免疫反應(yīng)，即排斥反應(yīng)有關(guān)。這說(shuō)明消除CD3+CD56-細(xì)胞能夠減少GVHD而不影響腫瘤殺傷效能。這為我們應(yīng)用CIK細(xì)胞通過(guò)HLA屏障治療腫瘤提供了新的思路［12］。

4自體CIK的臨床Ⅰ期研究

最早的關(guān)于CIK細(xì)胞治療惡性腫瘤的臨床研究來(lái)自于Schmidt-Wolf等人［10］，在這項(xiàng)研究中，一例54歲的濾泡性淋巴瘤患者，在2個(gè)周期內(nèi)接受了1.84×109的自體CIK細(xì)胞，沒(méi)有任何不良反應(yīng)，骨髓增生完全緩解（CR），患者臨床癥狀顯著改善，血漿IFN-γ及TGF-β增多。Leemhuis等［36］連續(xù)報(bào)道了自體干細(xì)胞移植（HSCT）后復(fù)發(fā)的淋巴瘤患者的一期臨床治療。9例淋巴瘤患者，年齡23~67歲，7例為進(jìn)展期霍奇金病(HD)，2例B淋巴細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤（NHL），9例患者共進(jìn)行了21次輸注，單次治療量1.0×109~1.0×1010細(xì)胞數(shù)，無(wú)不良反應(yīng)發(fā)生，3例HD患者和1例NHL患者治療有效，2例HD獲得PR，2例SD，其中1例SD維持18個(gè)月。除6例晚期轉(zhuǎn)移實(shí)體瘤患者外，在一項(xiàng)Ⅰ期臨床試驗(yàn)中，Olioso等［37］納入6例進(jìn)展期淋巴瘤患者，每例患者平均CIK細(xì)胞輸注量為7×109（2.2×109~21×109），3周為一個(gè)周期，每周3次，1例中心母細(xì)胞—中心細(xì)胞性（CB-CC）淋巴瘤患者獲得CR，并維持44周，其余患者對(duì)CIK細(xì)胞治療無(wú)臨床反應(yīng)。個(gè)別患者僅出現(xiàn)低熱反應(yīng)。值得注意的是，免疫效應(yīng)，如IFN-γ和TNF-α的顯著升高，僅在治療有效的患者中被觀(guān)察到，而臨床無(wú)效的患者無(wú)明顯改變。楊波等［38］研究發(fā)現(xiàn)，9例老年B細(xì)胞性惡性淋巴瘤患者輸注2×109~3×109CIK細(xì)胞后，靜脈注射IL-2單次劑量1×104單位/天，連續(xù)10天，每4周重復(fù)，7例患者完成8周期治療，2例患者完成4周期治療，所有患者均未出現(xiàn)不良反應(yīng)，淋巴瘤相關(guān)癥狀得到緩解，生活質(zhì)量明顯提高，CD3+、CD3+CD8+和CD3+CD56+T細(xì)胞比例升高，非特異性腫瘤標(biāo)志物，例如β2微球蛋白和乳酸脫氫酶(LDH)水平下降。總體來(lái)講，9例中8例患者獲得CR，試驗(yàn)結(jié)果令人興奮。劉洋等［39］采取了同樣的治療方式治療6例骨髓增生異常綜合征的老年患者，CIK細(xì)胞治療后CD3+、CD3+CD8+、CD3+CD56+細(xì)胞比例明顯升高，所有患者均未出現(xiàn)嚴(yán)重不良反應(yīng)。CIK細(xì)胞治療有效地減少了MDS患者感染的發(fā)生，縮短了高熱時(shí)間。在疾病穩(wěn)定期，CIK細(xì)胞輸注可減少紅細(xì)胞的輸注量，穩(wěn)定血紅蛋白水平，患者生活質(zhì)量提高。但不能改變MDS向高危亞型轉(zhuǎn)化的自然病程。此實(shí)驗(yàn)中患者未接受促紅細(xì)胞生成素治療。下一步Ⅰ期試驗(yàn)［40］，20例患者，年齡57~93歲，平均83歲，9例淋巴瘤，7例MDS，2例多發(fā)性骨髓瘤（MM），3例慢性淋巴細(xì)胞白血病（CLL），1例急性髓性白血病（AML）。同樣，輸注2×109~3×109CIK細(xì)胞后，靜脈注射IL-2單次劑量1×104單位/天，連續(xù)10天。6例患者完成4個(gè)周期治療，14例患者完成8個(gè)周期循環(huán)。以CD3+、CD3+CD8+和CD3+CD56+T細(xì)胞的增加為免疫治療陽(yáng)性。同時(shí)β2-微球蛋白和乳酸脫氫酶(LDH)顯著降低。3例患者治療中出現(xiàn)不適及低熱，對(duì)癥處理后癥狀消失，治療結(jié)束后，11例患者獲得CR，7例PR，2例SD，其中，9例淋巴瘤患者中有5例臨床狀態(tài)得到改善，甚至有3例從PD到CR，4例患者維持CIK治療前狀態(tài)，其余11例臨床癥狀獲得改善，其中9例達(dá)到CR或PR。KPS評(píng)分從平均57分提高至83分。研究小組進(jìn)行的另一項(xiàng)研究中，9例彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤的老年患者（65~90歲）在接受了4個(gè)周期R-CHOP方案化療后，7例達(dá)到PR，2例CR，9例患者均接受了8周期上述CIK加IL-2的治療，單次輸注5.0×109~1.0×1010CIK細(xì)胞，2例出現(xiàn)乏力低熱。截止研究終點(diǎn)，9例患者全部達(dá)到CR，在23~35個(gè)月的生存期內(nèi)，淋巴瘤相關(guān)癥狀顯著改善。同樣觀(guān)察到CD3+、CD3+CD8+和CD3+CD56+T細(xì)胞顯著增高［41］。采用同樣的方法，研究小組評(píng)估了CIK細(xì)胞對(duì)B細(xì)胞急性淋巴細(xì)胞白血病（CLL）的療效。這一次不同的是，用于治療免疫缺陷性疾病的胸腺肽α1用于試驗(yàn)，胸腺肽α11.6mg/d，皮下注射，隔日1次；每次回輸CIK細(xì)胞數(shù)為4×109~6×109，回輸后應(yīng)用IL-21mU/d，皮下注射，第1～10天。28d為1個(gè)療程。結(jié)果表明，胸腺肽α1增強(qiáng)免疫治療后體外誘導(dǎo)CIK細(xì)胞在擴(kuò)增數(shù)量、效應(yīng)細(xì)胞擴(kuò)增倍數(shù)、比例及體外殺瘤活性4個(gè)方面均明顯高于胸腺肽α1治療前。5例患者共接受46個(gè)療程的CIK細(xì)胞聯(lián)合IL-2治療，未觀(guān)察到明顯不良反應(yīng)。治療后5例患者一般情況得到不同程度改善，CD3+、CD3+CD8+、CD3+CD56+細(xì)胞比例明顯升高，血清β2微球蛋白水平顯著下降，感染頻次減少，程度減輕，3例由部分緩解(PR)達(dá)到完全緩解，1例由疾病穩(wěn)定(SD)達(dá)到PR，1例由疾病進(jìn)展達(dá)到SD［42］。Yang等［43］報(bào)道了1例68歲男性患者，患進(jìn)展性難治性多發(fā)孤立漿細(xì)胞瘤伴多處骨質(zhì)損害，CIK細(xì)胞每月輸注一次2×109~8×109，共21個(gè)周期，所有骨損達(dá)到緩解，患者獲得CR，直到隨訪(fǎng)結(jié)束。臨床一期自體CIK細(xì)胞治療中少有報(bào)道抗腫瘤治療無(wú)效的。5例老年急性髓細(xì)胞白血病（AML）共接受46個(gè)周期的CIK細(xì)胞輸注治療，回輸后所有患者均未出現(xiàn)不良反應(yīng)，CD3+、CD3+CD8+、CD3+CD56+細(xì)胞比例顯著增高，感染發(fā)生率以及高熱持續(xù)時(shí)間明顯降低，值得一提的是，CIK細(xì)胞治療能夠大大減少患者所需輸血次數(shù)。研究認(rèn)為CIK細(xì)胞輸注雖不能改變病程的轉(zhuǎn)歸，但在患者疾病進(jìn)展期以及終末期，采用化療聯(lián)合CIK治療可使患者病情一度平穩(wěn)，延長(zhǎng)生存時(shí)間［44］。

5同種異體CIK臨床Ⅰ期研究

2007年，Introna等［45］首次報(bào)道CIK在同種異體造血干細(xì)胞移植后復(fù)發(fā)患者中的肯定療效。11例患者平均年齡53歲（24~62歲），4例AML，3例HD，1例pre-BALL，1例CMML，2例MDS。6例接受有血緣關(guān)系造血干細(xì)胞移植，5例接受無(wú)關(guān)供體造血干細(xì)胞移植。除2例外，其余9例患者接受低強(qiáng)度預(yù)處理，平均移植315天后，給予1~7次CIK回輸，每3~4周1次，平均回輸量12.4×106（7.2×106~87.4×106），盡管回輸被視為安全無(wú)副作用，在最后一次回輸后30天內(nèi)4例患者發(fā)生了急性GVHD，其中2例發(fā)展為廣泛性慢性GVHD(Ⅱ級(jí))，然而，這些GVHD僅發(fā)生于CIK細(xì)胞回輸前接受非血緣供體移植的患者，因此不能結(jié)論為GVHD由異體CIK細(xì)胞引起。實(shí)驗(yàn)結(jié)果6例未從CIK細(xì)胞中獲益，最終死亡。1例獲得SD，1例PR，3例獲得CR。2012年，Laport等［46］報(bào)道了另一種CIK治療方法。18例接受可配型的直系親屬的造血干細(xì)胞移植，平均年齡53歲，其中NHL5例，AML3例，MM3例，CLL2例，ALL2例，MDS2例，HD1例。12例接受低強(qiáng)度移植，6例接受清髓性移植，16例在接受CIK免疫治療前行減瘤治療，包括化療、激素治療以及手術(shù)、供體淋巴細(xì)胞輸注。平均輸注時(shí)間在復(fù)發(fā)后4個(gè)月（1~34個(gè)月），給以一次性注射不同劑量，1×107（4例）、5×107（6例）、1×108（8例）細(xì)胞數(shù)/Kg，發(fā)生GVHD2例，自限性慢性GVHD1例。平均總OS28個(gè)月，平均無(wú)事件生存時(shí)間4個(gè)月，8例隨訪(fǎng)期間內(nèi)1~69個(gè)月因復(fù)發(fā)死亡（平均20個(gè)月）。實(shí)驗(yàn)顯示CIK治療后，腫瘤緩解期與異基因移植平均時(shí)間有所延長(zhǎng)。在另一項(xiàng)研究中，臍帶血來(lái)源的HLA匹配的CIK細(xì)胞被用于復(fù)發(fā)的急性白血病患者臍帶血移植后，無(wú)急慢性副作用發(fā)生。1例出現(xiàn)Ⅲ級(jí)GVHD的部分伴隨癥狀［47］。Linn等［48］報(bào)道了對(duì)各種個(gè)體化化療方案和供體淋巴細(xì)胞輸注不敏感的患者，行CIK細(xì)胞治療后的喜人成果。8例AML，3例ALL，3例HD，1例CML，1例NHL。16例患者共接收55次CD3+細(xì)胞輸注，劑量范圍從1×107~2×108/kg不等，3例出現(xiàn)急性GVHD，經(jīng)過(guò)治療好轉(zhuǎn)，6例患者未從治療中獲益，5例患者因?yàn)橥瑫r(shí)應(yīng)用了其他治療手段，臨床療效未評(píng)估。最終，2例ALL，2例HD，1例AML患者被認(rèn)為CIK治療獲益。

6Ⅱ期自體CIK細(xì)胞臨床試驗(yàn)

江浩等［49］對(duì)41例化療前急性白血病患者CIK治療的有效性進(jìn)行了研究。19例患者化療前接受CIK治療，22例患者單純化療作為對(duì)照組。兩組化療方案基本相同。免疫化療組中，8例患者接受4個(gè)周期，2例患者接受3個(gè)周期、5例患者接受2個(gè)周期、4例患者僅1個(gè)周期CIK細(xì)胞治療。平均細(xì)胞輸注量（14.2±8.5）×109/L，化療后評(píng)估，所有患者獲得CR并持續(xù)超過(guò)6個(gè)月，1年后隨訪(fǎng)，CIK組73.4%患者持續(xù)CR，對(duì)照組27.3%。因此，化療前接受CIK細(xì)胞治療的患者獲得CR比例顯著高于單純化療組，并且，3個(gè)周期及以上CIK治療療效較少于3個(gè)周期者有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。聯(lián)合治療組所有患者隨訪(fǎng)期結(jié)束前保持CR，然而，9例中有4例CIK治療少于3個(gè)周期的患者在隨訪(fǎng)期結(jié)束后復(fù)發(fā)。另一項(xiàng)研究中，13例通過(guò)自體干細(xì)胞移植獲得臨床緩解的AML患者和11例殘留病灶PCR檢測(cè)后伊馬替尼治療的CML患者接受了CIK治療，其中11例AML、10例CML成功取得自體CIK，接受了每3周一次的CIK輸注治療。AML中，3例1次、1例2次、5例3次、2例4次CIK細(xì)胞輸注。平均輸注時(shí)間為HSCT后16天（13~37天），也就是血細(xì)胞減少恢復(fù)后的時(shí)間。CML組，所有患者接受4次輸注。AML組單次平均回輸細(xì)胞數(shù)為2.72×109（1.3×109~78.6×109），CML組為25.72×109（13.76×109~54.94×109）。發(fā)熱是唯一的副作用，對(duì)癥處理后癥狀消失。研究結(jié)果顯示，無(wú)復(fù)發(fā)存活期較歷史對(duì)照組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，兩組患者均未從CIK治療中獲益［50］。鐘國(guó)成等［51］研究了CIK聯(lián)合DC對(duì)多發(fā)性骨髓瘤的臨床療效。16例患者隨機(jī)分為兩組，一組單純化療，另一組化療聯(lián)合DC-CIK治療，PBMC體外經(jīng)GM-CSF和IL-4培養(yǎng)后加入多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞裂解物獲得DC，CIK和DC以單次2.5×109~5×109的細(xì)胞數(shù)輸注，免疫治療后，CD3+/CD8+和CD56+細(xì)胞數(shù)顯著上升，同時(shí)，HSP70和TH1/TH2比例增高，而炎癥因子TGF-β、β2微球蛋白和CD4+CD25+調(diào)節(jié)T細(xì)胞減少。研究結(jié)果，兩組OS分別為42.9個(gè)月和33.6個(gè)月，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，聯(lián)合治療組的QOL評(píng)分以及臨床指標(biāo)均優(yōu)于單獨(dú)化療組。Wang等［52］用超低劑量吉西他濱（10mg，d1~5）聯(lián)合CIK細(xì)胞（每次2×109~8×109，共3次），治療2例由骨髓增生異常綜合征轉(zhuǎn)化的急性髓系白血病取得良好療效，骨髓增生改善。

7總體療效和毒副作用

匯總以上數(shù)據(jù)，208例患者年齡從18~93歲，平均53歲，參加了18項(xiàng)臨床試驗(yàn)，最少的接受1次輸注治療，最多的接受21次CIK輸注治療，平均5.5次，中位數(shù)3.5次，單次細(xì)胞數(shù)1×108~2.8×1010，平均5×109，自體CIK治療107例，有效率55%（CR+PR+SD），50例接受異體CIK治療，有效率20%，另外51例患者行CIK聯(lián)合常規(guī)化療，73.4%達(dá)到CR。值得注意的是，所有患者免疫力增強(qiáng)、感染次數(shù)減少、高熱時(shí)間縮短，必須輸血次數(shù)減少。CIK輸注后唯一的副作用為低熱（37.5~40℃），發(fā)生率為26.37%，但癥狀不超過(guò)24小時(shí)并且易于處理，GVHD發(fā)生率為14%，但均發(fā)生在造血干細(xì)胞移植和供體淋巴細(xì)胞輸注患者，因此不能結(jié)論為GVHD由異體CIK細(xì)胞引起。在一項(xiàng)研究中，2例患者出現(xiàn)一過(guò)性的心律失常，但沒(méi)用直接證據(jù)表明是由于CIK輸注引起。

8結(jié)論

獲得性免疫療法取得了突破性進(jìn)展，通過(guò)激活患者自身免疫系統(tǒng)，為人體自身免疫系統(tǒng)識(shí)別并攻擊破壞腫瘤細(xì)胞，提供了一種全新的免疫治療方法，在腫瘤治療中前景廣闊，為人類(lèi)戰(zhàn)勝腫瘤提供了一種新的治療方法。在動(dòng)物及實(shí)驗(yàn)室研究中，CIK細(xì)胞展現(xiàn)出強(qiáng)大的抗腫瘤能力。技術(shù)簡(jiǎn)便、培養(yǎng)費(fèi)用低以及非MHC限制性細(xì)胞毒性都有力地推動(dòng)了CIK從實(shí)驗(yàn)室到臨床的轉(zhuǎn)化。因此，我們可以預(yù)見(jiàn)，很快CIK細(xì)胞將被用于各系統(tǒng)不同類(lèi)型腫瘤的臨床治療。多項(xiàng)臨床試驗(yàn)已經(jīng)顯示CIK細(xì)胞能夠提高腫瘤患者生活質(zhì)量，延長(zhǎng)患者生存期［5~7，30］。在血液系統(tǒng)腫瘤中，CIK細(xì)胞顯示出相當(dāng)?shù)目沽鲂?yīng)，可防止腫瘤復(fù)發(fā)，提高患者生存質(zhì)量，延長(zhǎng)無(wú)進(jìn)展生存時(shí)間。在自體CIK細(xì)胞治療的患者中，多數(shù)表現(xiàn)出疾病狀態(tài)的改善，體現(xiàn)在QOL評(píng)分和患者一般狀況的提升，甚至在腫瘤晚期患者身上也顯現(xiàn)出同樣有效。123例患者中，5例SD，18例PR，41例CR，52%獲得疾病狀態(tài)的改善，總反應(yīng)率為48%，多項(xiàng)研究中，免疫指標(biāo)提高，腫瘤標(biāo)志物降低，炎癥發(fā)生率較CIK細(xì)胞治療前明顯減少。CIK細(xì)胞的另一大優(yōu)勢(shì)在于極少甚至沒(méi)有不良反應(yīng)，常見(jiàn)的藥物反應(yīng)也很輕微，患者耐受性好。近四分之一的患者，包括異體免疫細(xì)胞治療者，輕微的發(fā)熱等癥狀多在24小時(shí)內(nèi)自行好轉(zhuǎn)消失或可通過(guò)抗感染治療處理緩解，一些其他少見(jiàn)的不良反應(yīng)也很輕微并易于治療。除外CIK細(xì)胞自體治療的特性外，非MHC限制性以及極低的異體反應(yīng)性使得CIK細(xì)胞治療能夠突破HLA屏障，尤其是在異基因HSCT后。在同一系列研究中，四項(xiàng)臨床研究中使用異基因CIK細(xì)胞證明可行并有效，不良反應(yīng)發(fā)生率和程度基本一致。結(jié)果鼓舞人心。但重點(diǎn)不能僅僅著眼于CIK的治療效果，而應(yīng)注意到它的低毒性，尤其是移植物抗宿主反應(yīng)。50例中僅有10例發(fā)生GVHD。值得注意的是，50例中大多數(shù)在CIK輸注前進(jìn)行了DLI(供者淋巴細(xì)胞輸注)，但效果差強(qiáng)人意。強(qiáng)調(diào)了實(shí)驗(yàn)室研究中CIK細(xì)胞治療作為DLI的升級(jí)版在減少異基因移植和疾病控制中的優(yōu)勢(shì)。然而，目前CIK的臨床治療仍然局限于與傳統(tǒng)方法聯(lián)合治療慢性疾病，對(duì)于急性白血病的治療仍然空白。除了陽(yáng)性結(jié)果外，同樣有一些數(shù)據(jù)提示，CIK細(xì)胞或許對(duì)血液系統(tǒng)腫瘤沒(méi)有實(shí)質(zhì)性的效果，比如對(duì)AML患者獲益最少，不同研究者均認(rèn)為，不合理的時(shí)間和不足的細(xì)胞數(shù)量均會(huì)影響療效，Introna等［47］研究發(fā)現(xiàn)，CD3+CD56+細(xì)胞不表達(dá)CD62L和CD27，這兩個(gè)細(xì)胞表面分子對(duì)淋巴細(xì)胞歸巢和抗腫瘤免疫具有重要作用，或許是CIK細(xì)胞缺乏遠(yuǎn)期效果的重要原因。目前CIK治療作為二線(xiàn)方案與標(biāo)準(zhǔn)化療或同時(shí)或在標(biāo)準(zhǔn)化療后進(jìn)行。之所以如此，是因?yàn)槟壳暗臏?zhǔn)入標(biāo)準(zhǔn)和安全考慮。然而，鑒于CIK的安全性和相對(duì)無(wú)害的提取方式，CIK細(xì)胞應(yīng)該被作可使患者收益的一線(xiàn)治療，和常規(guī)治療方案結(jié)合，特別是自體CIK細(xì)胞。然而，CIK細(xì)胞的療效以及在多大程度上影響患者的生存期，目前下結(jié)論還為時(shí)過(guò)早。事實(shí)上，由于實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的不同，不同CIK細(xì)胞表型以及對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的不同評(píng)估方式，使得CIK研究難以進(jìn)一步發(fā)展定論。另外，輸注時(shí)間似乎更為重要。大量研究顯示，CIK細(xì)胞是有效和安全的免疫治療方法，很多的改革和創(chuàng)新必將促進(jìn)這個(gè)新興領(lǐng)域的進(jìn)步，并在血液系統(tǒng)腫瘤治療中展現(xiàn)出舉足輕重的地位。

作者：師瑞 雷培森 阿明 花華 楊甲強(qiáng) 毛成濤 單位：解放軍第四五一醫(yī)院