血清脂蛋白范文

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在國外，脂蛋白電泳方法已商品化，在分析速度精度等方面均可滿足常規(guī)應(yīng)用。參照有關(guān)方法和技術(shù)[1,5]，我們得到了一種適合于國內(nèi)常規(guī)應(yīng)用的脂蛋白電泳的快速分析法。

1材料和方法

1.1使用試劑

1.1.1電極緩沖液巴比妥鈉25mmol/L，乙二胺四乙酸二鈉0.94mmol/L,以1.0mmol/LHCI調(diào)Phg至8.6。

1.1.2凝膠緩沖液：巴比妥鈉30mmol/L，乙二胺四乙酸二鈉0.94mmol/L，蔗糖146mmol/L，1.0mol/LHCL調(diào)pH至8.6（含聚乙烯吡咯烷酮K-605g/L）。

1.1.35g/L瓊脂糖凝膠，以凝膠緩沖液制備并分裝后，貯于4℃。

1.1.470g/L白蛋白溶液（北京化工廠）。

1.1.5染色貯備液脂肪紅7B0.6mmol/L，溶于無水甲醇中。

1.1.6染色應(yīng)用液取貯液5ml，滴加0.1mol/LNaOH1.0ml，用前制備。

1.1.7漂染液甲醇：水＝5:2（V/V）

1.2操作方法

1.2.1凝膠片制備取無色透明的投影膠片（0.1mm），切成80×110mm，放于水平臺面上用一內(nèi)徑為70×95mm的有機(jī)玻璃邊框壓在其上，將加熱融化的瓊脂糖冷至50～60℃，加白蛋白至終濃度約為2g/L，混合，輕輕鋪于膠片上，使膠厚度為1mm左右，膠凝固后小心去除邊框。

1.2.2加樣用自制加樣器制備樣品槽[6]，加入血清樣品3～5μl。

1.2.3電泳膠片放入預(yù)冷至4～8℃的電泳槽支架上，以四層濾紙與電極緩沖液連接，每個膠片恒流40Ma，電泳至區(qū)帶展開約30mm（約需20分鐘，加或不加指示染料）。

1.2.4染色膠片取出，于65℃左右烘干（約40分鐘），放于水平盒中，加入新配的染色液覆蓋整個膠片表面，放3～5分鐘（可據(jù)室內(nèi)溫度而定）。

1.2.5漂洗與干燥除去膠片表面的染色液，浸入漂洗液中，輕輕搖動30秒，如所用漂洗液較少，可再換一次漂洗液洗30秒，轉(zhuǎn)入65℃左右干燥（約10分鐘）。

1.2.6掃描測定膠片點(diǎn)樣面向下放入掃描載板上，用軟紙蘸少量水輕輕擦去膠片背面的污跡，在520nm附近掃描測定。

2結(jié)果和討論

方法所得圖譜清晰，區(qū)帶平整，β-與前β-帶分離較好，底色對測定基本無干擾，原點(diǎn)區(qū)無明顯染料積存

用本法測定146例健康人，所得參考值范圍（均值±SD）分別是：52.2±5.4%、pre-β13.1±5.8%、α34.0±5.6%，與有關(guān)資料結(jié)果相近[2,4,5]。

脂蛋白帶在電泳過程中易擴(kuò)散和拖尾，本方法加入了一定濃度的蔗糖和白蛋白，保證了區(qū)帶的平整，同時，在電泳時加大電場強(qiáng)度，使電泳在短時間內(nèi)完成，區(qū)帶可擴(kuò)散的機(jī)會降低，所得區(qū)帶較密集。應(yīng)該指出，電場強(qiáng)度的加大，電泳過程中產(chǎn)熱加快，因而在室溫較高時，采用了將電泳槽預(yù)冷的方法，以減少過熱造成脂蛋白帶的分解。白蛋白濃度在2～5g/L間均可獲良好結(jié)果。

β-與前β-帶的分離好壞是脂蛋白電泳是否成功的關(guān)鍵技術(shù)問題，本方法用較低離子強(qiáng)度的緩沖液，降低膠濃度，并采用上述使區(qū)帶密集的方法，較好地解決了這一問題。

染色中用新制備染料及用我們的方法制備加樣槽可保證在原點(diǎn)區(qū)基本無干擾。由于染色液對脂蛋白較為敏感，對于高脂血樣品在加樣量要適當(dāng)減少，否則區(qū)帶的分辨率會下降，甚至導(dǎo)致錯誤的分型結(jié)果。

凝膠所用的支持體廉價易得，操作方便，有很好的本底重復(fù)性，并使結(jié)果靈活地長期保存成為可能。

經(jīng)過實(shí)驗認(rèn)為，本方法快速、靈敏，適于大批量樣品（至少每次20個）操作，適于在常規(guī)實(shí)驗室應(yīng)用，特別是對于脂蛋白測定的商品化將有所幫助。