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摘要建立了薄層色譜-熒光分光光度法測定黃連中小檗堿的含量。以1%鹽酸甲醇為溶劑超聲提取，用苯-醋酸乙酯-甲醇-異丙醇-氨(6∶3∶1.5∶1.5∶0.5)展開，甲醇洗脫，調節pH值為12，在Ex＝365nm，Em＝409nm的條件下測定其熒光強度，線性范圍為0.012～0.12ng/ml，r＝0.9991，平均回收率為97.5%。
關鍵詞：薄層色譜-熒光分光光度法；黃連；小檗堿
黃連為毛莨科植物黃連(CoptischinensisFranch)、三角葉黃連(CoptisdeltoidesC.Y.ChengetHsiao)或云連(CoptisteetaWall)的干燥根莖。其主要生物活性成分為小檗堿。本文采用薄層色譜-熒光分光光度法測定黃連藥材中小檗堿的含量。
1儀器與試藥
1.1儀器RF-540型熒光分光光度儀，CS-930雙波長薄層掃描儀(日本島津)。
1.2試藥鹽酸小檗堿對照品(中國藥品生物制品檢定所)；黃連藥材(市售)。
2方法與結果
2.1對照品溶液的制備精密稱取鹽酸小檗堿對照品適量，加入甲醇制成1mg/ml貯備液。用前取貯備液適量用甲醇稀釋成20μg/ml的對照品溶液。
2.2薄層色譜條件〔1，2〕以苯-醋酸乙酯-甲醇-異丙醇-氨(6∶3∶1.5∶1.5∶0.5)為展開劑，展開前用氨水飽和15min，展距為13cm，晾干后置紫外燈(365nm)下檢視，小檗堿呈現黃綠色熒光斑點(Rf＝0.37)。
2.3熒光測定條件的選擇
2.3.1pH條件的選擇取0.1ml對照品溶液，加入不同體積的1mol/L氫氧化鈉溶液，在Ex＝365nm，Em＝409nm處測定鹽酸小檗堿的熒光強度。結果顯示20mmol/L氫氧化鈉溶液熒光強度最大(見表1)。
表1氫氧化鈉濃度對小檗堿熒光強度的影響
氫氧化鈉(mmol/L)512.5202550小檗堿熒光強度11.649.181.765.928.1
2.3.2熒光光譜的繪制取對照品溶液用甲醇稀釋成約100ng/ml(堿液濃度為20mmol/L)，進行熒光強度掃描測定，從掃描圖譜得到小檗堿最大激發波長365nm，最大發射波長為409nm(見圖1)。
2.4線性關系及精密度試驗取對照品溶液2，8，12，16，20μl分別點于同一薄層板上，依法展開、洗脫，將洗脫液依次移入試管內，精密加入甲醇2ml，1mol/L氫氧化鈉溶液75μl，搖勻后測定熒光強度。結果表明，小檗堿在0.012～0.12ng/ml范圍內與熒光強度有良好的線性關系，線性方程為F＝24.17＋164.0C，r＝0.9991。采用外標兩點法計算樣品中小檗堿的含量。精密度實驗結果表明，同板誤差RSD＝2.14%，板間誤差RSD＝2.79%(n＝5)。
2.5樣品含量測定取黃連藥材粉末約0.2g，精密稱定，加1%鹽酸甲醇溶液約150ml，60℃水浴加熱15min，超聲30min，加甲醇稀釋至200ml，搖勻，靜置后取上清液作為供試品溶液。精密吸取對照溶液4，8μl及黃連提取液2μl點于同一硅膠G板上，展開，將板上相應斑點刮入離心管中，加入甲醇1ml，振搖約15min，超聲20min，離心10min(4000r/min)，吸取上清液0.8ml于試管內，加入甲醇2ml和1mol/L氫氧化鈉溶液75μl，搖勻，測定熒光強度，結果3批黃連藥材中小檗堿平均含量為5.16%(g/g)。
2.6回收率試驗取已知小檗堿含量的黃連藥材5份，精密稱定，加入與小檗堿含量相當的對照品溶液，溶劑揮干后，依2.5項下操作，測定小檗堿的含量。結果表明平均回收率為96.5%，RSD＝5.70%。
3討論
文中采用的薄層展開條件優于文獻報道方法，靈敏度高，選擇性好，能夠將小檗堿與其他成分有效分離，且斑點圓整，無拖尾現象。適用于小檗堿的痕量分析及復方制劑中小檗堿的含量分析。
參考文獻
〔1〕中國藥典中藥薄層色譜彩色圖集.1993：70
〔2〕中國藥典2000年版.一部.2000：251
〔3〕藏鳳和.薄層-比色法測定黃連中小檗堿的含量.藥物分析雜志，1986，6(2)：100新晨