牛磺熊去氧膽酸有關(guān)物質(zhì)的合成范文

本站小編為你精心準(zhǔn)備了牛磺熊去氧膽酸有關(guān)物質(zhì)的合成參考范文，愿這些范文能點(diǎn)燃您思維的火花，激發(fā)您的寫(xiě)作靈感。歡迎深入閱讀并收藏。

《化學(xué)試劑雜志》2016年第一期

摘要:

為加強(qiáng)對(duì)牛磺熊去氧膽酸原料藥和制劑產(chǎn)品的質(zhì)量控制，合成了可能存在的兩個(gè)有關(guān)物質(zhì):牛磺鵝去氧膽酸和牛磺石膽酸，結(jié)構(gòu)經(jīng)1HNMR和MS確證，并通過(guò)高效液相色譜儀建立了牛磺熊去氧膽酸有關(guān)物質(zhì)的分析方法，可為化學(xué)藥的仿制研究及其原料藥與制劑的質(zhì)量控制提供依據(jù)和參考。

關(guān)鍵詞:

牛磺熊去氧膽酸;有關(guān)物質(zhì);合成;結(jié)構(gòu)確證

牛磺熊去氧膽酸(Tauroursodeoxycholicacid)(1)，化學(xué)名為2-{［(3，5)-3，7-二羥基-24-氧代膽甾烷-24-基］氨基}乙烷磺酸二水合物，結(jié)構(gòu)式如下所示。由意大利貝思迪大藥廠(BruschettiniS.R.I.)研制，1991年首次在意大利上市，2007年以商品名滔羅特(Taurolite)獲準(zhǔn)在中國(guó)銷售，臨床主要用于治療膽囊膽固醇結(jié)石、原發(fā)硬化性膽管炎、原發(fā)膽汁性肝硬化和慢性丙型病毒性肝炎等。卓超等［1，2］報(bào)道，牛磺熊去氧膽酸的合成均以熊去氧膽酸為原料來(lái)進(jìn)行。中國(guó)藥典(2015版)對(duì)熊去氧膽酸質(zhì)量規(guī)定中，要求控制鵝去氧膽酸、石膽酸的含量。在制備牛磺熊去氧膽酸過(guò)程中，原料熊去氧膽酸中若含有鵝去氧膽酸和石膽酸，會(huì)生成對(duì)應(yīng)的牛磺鵝去氧膽酸和牛磺石膽酸。為了對(duì)牛磺熊去氧膽酸原料藥及制劑進(jìn)行質(zhì)量控制，需要制備與其有關(guān)物質(zhì)作為對(duì)照品。Venturoni等［3］以鵝去氧膽酸為原料，使用2-乙氧基-1-乙氧碳酰基-1，2-二氫喹啉(EEDQ)作為縮合試劑來(lái)合成牛磺鵝去氧膽酸鈉，產(chǎn)率93%。鄧勇等［4］使用2，2'-二硫二吡啶、2，2'-二硫二苯并噻唑或胱胺類化合物合成活性硫酯，再用牛磺酸胺解制備牛磺鵝去氧膽酸和牛磺石膽酸，產(chǎn)率為76%～85%。上述方法或存在試劑價(jià)格昂貴(如EEDQ)，或存在二硫化試劑的使用易造成后處理繁瑣且產(chǎn)品收率及純度很難提高等問(wèn)題。本研究參考文獻(xiàn)［5-9］對(duì)合成方法進(jìn)行改進(jìn)，以鵝去氧膽酸(1)為原料，在三乙胺作用下與氯甲酸異丁酯反應(yīng)形成混酐，后在堿性條件下與牛磺酸反應(yīng)形成牛磺鵝去氧膽酸鈉，用鹽酸酸化后制得牛磺鵝去氧膽酸(有關(guān)物質(zhì)A)，重結(jié)晶后收率為92%。參照牛磺鵝去氧膽酸的合成，以石膽酸(2)為原料制得了牛磺石膽酸(有關(guān)物質(zhì)B)，收率93%，合成路線如下所示。并建立了一種用于有關(guān)物質(zhì)純度檢測(cè)的HPLC分析方法，經(jīng)檢測(cè)有關(guān)物質(zhì)A和B的純度均在98.5%以上。

1實(shí)驗(yàn)部分

1.1主要儀器與試劑Mercury400型核磁共振儀(美國(guó)Varian公司);電噴霧三重四級(jí)質(zhì)譜儀(美國(guó)Waters公司);TektronixX-4型熔點(diǎn)儀(溫度計(jì)未經(jīng)校正，北京泰克儀器有限公司);Agilent1100型高效液相色譜儀(美國(guó)安捷倫科技公司);魯?shù)婪騃型旋光儀(美國(guó)魯?shù)婪蚬?。牛磺熊去氧膽酸對(duì)照品(編號(hào)110846-200506，中國(guó)藥品生物制品檢定所);其他試劑均為分析純。

1.2合成方法

1.2.1牛磺鵝去氧膽酸的合成于100mL圓底燒瓶中加入10.0g(25.5mmol)鵝去氧膽酸和60mL丙酮，攪拌溶解后冰水浴降溫至0℃，然后加入3.1g(30.6mmol)三乙胺，控制內(nèi)溫0～5℃，滴加3.85g(28.1mmol)氯甲酸異丁酯。滴加完畢，室溫?cái)嚢瑁琓LC檢測(cè)反應(yīng)至結(jié)束，抽濾，得鵝去氧膽酸活性酸酐濾液待用。將1.3g(30.5mmol)氫氧化鈉溶解在30mL水中，加入3.19g(25.5mmol)牛磺酸，繼續(xù)攪拌30min后，將其滴加到上述鵝去氧膽酸活性酸酐的濾液中，室溫反應(yīng)5h。反應(yīng)畢，減壓蒸除丙酮。瓶?jī)?nèi)剩余物，用5%鹽酸調(diào)至pH3～4，乙酸乙酯萃取(30mL×3)。水相攪拌下緩慢加入5mL濃鹽酸酸化，20℃下攪拌16h，抽濾，濾餅50℃減壓干燥，得牛磺鵝去氧膽酸粗品(約12.5g)，收率98%。

1.2.2牛磺石膽酸的合成以5.0g(13.3mmol)石膽酸和1.6g(16.0mmol)三乙胺、2.0g(14.6mmol)氯甲酸異丁酯、1.62g(13.3mmol)牛磺酸為原料，按照有關(guān)物質(zhì)A的制備方法制，得6.0g白色固體，總收率93%，純度98.7%(HPLC)，m.p．212～214℃，［α］20D=+27.5°(c=1.0，EtOH)［文獻(xiàn)［3］值:m.p．210～212℃，［α］20D=+27.9°(c=1.0，EtOH)］。1HNMR(DMSO-d6，400MHz)，δ:0.68(s，3H);0.91(s，3H);0.98(d，3H，J=4.2Hz);0.99～1.12(m，2H);1.20～1.60(m，15H);1.61～1.71(m，4H);1.81～1.86(m，2H);1.93～1.96(m，2H);2.07～2.18(m，2H);2.28～2.35(m，1H);3.05(t，2H，J=7.2Hz);3.45(m，1H);3.55(t，2H，J=7.2Hz)。ESI-MS，m/z(%):484.3［M+H］+。

1.3高效液相色譜檢測(cè)方法牛磺熊去氧膽酸、牛磺鵝去氧膽酸和牛磺石膽酸，用流動(dòng)相分別配制成0.5mg/mL供試液。混合液為分別取上述3個(gè)供試液等體積混合而成。色譜柱:WelchromC18柱(4.6mm×250mm，5μm);流動(dòng)相:V(0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液)∶V(甲醇)=30∶70;檢測(cè)波長(zhǎng):202nm;流速:1mL/min;柱溫:30℃;進(jìn)樣量:5μL。

1.3.1高效液相色譜分析利用上述高效液相色譜檢測(cè)方法對(duì)牛磺熊去氧膽酸對(duì)照品、牛磺鵝去氧膽酸、牛磺石膽酸及混合樣進(jìn)行液相色譜分析，檢測(cè)結(jié)果如圖1、2所示。由圖1、2可以看出，該分析方法用來(lái)作為牛磺熊去氧膽酸有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)方法可靠性高，3者混合樣品分離效果好，可為牛磺熊去氧膽酸的仿制研究及其原料藥與制劑的質(zhì)量控制提供依據(jù)和參考。

2結(jié)果與討論

2.1縮合劑的選擇對(duì)反應(yīng)收率的影響保持其他實(shí)驗(yàn)條件不變，分別使用氯甲酸乙酯、氯甲酸正丙酯、氯甲酸正丁酯、氯甲酸異丁酯作縮合劑，研究了不同縮合劑對(duì)反應(yīng)收率的影響，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。由表1可以看出，當(dāng)縮合劑選用氯甲酸乙酯、氯甲酸正丙酯和氯甲酸正丁酯時(shí)，由于其活性較高，底物分子中醇羥基可能與之反應(yīng)生成副產(chǎn)物，導(dǎo)致總反應(yīng)收率偏低;當(dāng)選用氯甲酸異丁酯作為縮合劑時(shí)，其反應(yīng)活性較低，能高選擇性地發(fā)生反應(yīng)，重結(jié)晶后總收率高達(dá)92%以上。

2.2物料物質(zhì)的量比對(duì)反應(yīng)收率的影響為考查形成活性酸酐過(guò)程中氯甲酸異丁酯用量對(duì)收率的影響，固定原料鵝去氧膽酸10.0g(25.5mmol)、三乙胺3.1g(30.6mmol)、60mL丙酮，改變氯甲酸異丁酯的投料量，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。由表2可以看出，隨著氯甲酸異丁酯與鵝去氧膽酸物質(zhì)的量比的增大，收率明顯增大，當(dāng)n(原料)∶n(氯甲酸異丁酯)≥1∶1.2時(shí)，收率降低。故選用鵝去氧膽酸與氯甲酸異丁酯的物質(zhì)的量比為1∶1.1。

2.3溶劑種類對(duì)反應(yīng)收率的影響保持其他實(shí)驗(yàn)條件不變，本實(shí)驗(yàn)分別選用二氧六環(huán)、丙酮、N，N-二甲基甲酰胺作為溶劑，研究了不同溶劑對(duì)產(chǎn)物收率的影響，結(jié)果如表3所示。采用二氧六環(huán)作為反應(yīng)溶劑時(shí)，從TLC結(jié)果可知生成活性酸酐的純度較差，進(jìn)而導(dǎo)致反應(yīng)收率較低;選用N，N-二甲基甲酰胺作為反應(yīng)溶劑，總反應(yīng)收率較高，但后處理過(guò)程中需蒸出高沸點(diǎn)的N，N-二甲基甲酰胺;選用丙酮作為反應(yīng)溶劑時(shí)，生成活性酸酐純度高，經(jīng)胺解轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物收率高達(dá)92%以上，同時(shí)其沸點(diǎn)低，易蒸餾出來(lái)循環(huán)使用。

2.4溫度的影響保持其他實(shí)驗(yàn)條件不變，本實(shí)驗(yàn)研究了不同反應(yīng)溫度對(duì)產(chǎn)物收率的影響。從表4可以看出，當(dāng)反應(yīng)溫度維持在10℃時(shí)，活性酸酐的胺解進(jìn)行較慢，可能有部分活性酸酐在堿性條件下發(fā)生水解重新變?yōu)樵希鵁o(wú)法生成產(chǎn)物;反應(yīng)溫度在30℃時(shí)，胺解反應(yīng)進(jìn)行順利，收率較高;反應(yīng)溫度在50℃時(shí)，反應(yīng)收率較低，可能的原因是溫度較高、活性酸酐水解加快，不利于產(chǎn)物的形成。因此選擇30℃作為最佳反應(yīng)溫度。

3結(jié)論

本研究分別以鵝去氧膽酸與石膽酸為原料，選用氯甲酸異丁酯作為縮合劑，經(jīng)過(guò)兩步反應(yīng)以高產(chǎn)率制得有關(guān)物質(zhì)牛磺鵝去氧膽酸和牛磺石膽酸，并建立了相關(guān)液相分析方法，可應(yīng)用于牛磺熊去氧膽酸的仿制研究及其原料藥與制劑的質(zhì)量控制中。

參考文獻(xiàn):

［1］卓超，馮煒，吳達(dá)俊．牛磺熊去氧膽酸的合成研究［J］．合成化學(xué)，2002，10(5):444-446．

［2］王海龍，吳成龍，鄧勇．牛磺熊去氧膽酸的合成［J］．中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志，2009，40(2):88-89．

［3］VENTURONIF，GIOIELLOA，SARDELLAR，etal．Con-tinuousflowsynthesisandscale-upofglycine-andtau-rine-conjugatedbilesalts［J］．Org．Biomol．Chem．，2012，10:4109-4115．

［4］鄧勇，王海龍，沈怡．用于制備膽酸偶聯(lián)物的化合物及其制備方法和用途:中國(guó)專利，101503454［P］．2009-08-12．

［5］鄧勇，沈怡，王海龍．膽酸類偶合物及其制備方法和用途:中國(guó)專利，101798332［P］．2010-08-11．

［6］ANELLIPL，LATTUADAL，LORUSSOV，etal．Conju-gatesofgadoliniumcomplexestobileacidsashepatocyte-directedcontrastagentsformagneticresonanceimaging［J］．J．Med．Chem．，2004，47(14):3629-3641．

［7］黃凌，張和平，秦和平．一種牛磺酸熊去氧膽酸水合物的制備方法:中國(guó)專利，102558268［P］．2012-07-11．

［8］ROBERTOA，VITTORLOR．Processforthepreparationoftaurocholicacids:EP，0629634［P］．1994-12-21．

［9］ARNEN．Preparationofconjugatedbileacidsusingmixedcarboxylicacidanhydrides［J］．Ark．Kemi．，1955，8(3):

作者：李永 曹俊 金幸 朱高峰 王建塔 湯磊 單位：貴州醫(yī)科大學(xué) 藥學(xué)院 上海慈瑞醫(yī)藥科技有限公司