土壤檢測(cè)論文范文
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第1篇
論文關(guān)鍵詞：越橘，根系分泌物，氨基酸，單糖
在植物生長(zhǎng)過(guò)程中，根系不僅從環(huán)境中攝取養(yǎng)分和水分，同時(shí)也向生長(zhǎng)介質(zhì)中分泌質(zhì)子、無(wú)機(jī)離子和大量的有機(jī)物，這些物質(zhì)和根組織脫落物一起統(tǒng)稱為根系分泌物（root exudates，RE）[1]。低分子有機(jī)物是根系分泌物的主要成分，例如，簡(jiǎn)單糖類、有機(jī)酸、氨基酸等[2-3]。其中簡(jiǎn)單糖類占根系分泌物總量50～70％，有機(jī)酸占20～30％，氨基酸占10～20％[4]。研究表明，根系通過(guò)分泌物改變根際物理、化學(xué)或生物學(xué)性質(zhì)來(lái)提高土壤養(yǎng)分的生物有效性，促進(jìn)植物對(duì)養(yǎng)分的吸收和利用農(nóng)業(yè)論文，在克服和緩解養(yǎng)分脅迫中具有十分重要的意義[5]。根系分泌物中的碳水化合物和氨基酸為根際微生物提供有效的碳源和氮源，且直接影響著菌根和根際微生物的數(shù)量和種群結(jié)構(gòu)[4,6]。
眾所周知，越橘的根系沒(méi)有根毛，是依靠菌根吸收土壤中的養(yǎng)分和水分[7]。有研究表明，植物的生長(zhǎng)周期是影響根系分泌的一個(gè)重要因素。在不同的生長(zhǎng)時(shí)期，植物根系分泌物的種類和數(shù)量都有所變化。本文以生產(chǎn)中廣泛栽培的北高叢越橘品種北陸（Northland）為試材，在生長(zhǎng)季進(jìn)行定期采樣，通過(guò)測(cè)定越橘根系分泌物中氨基酸和糖分的組成及含量，研究越橘根系分泌物氨基酸和糖分的組成特點(diǎn)和年周期變化規(guī)律，為深入研究越橘根系功能及根系-根際互作機(jī)理奠定基礎(chǔ)，也為果園的土壤管理提供理論依據(jù)免費(fèi)論文。
1材料與方法
1.1 材料
試驗(yàn)在吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)小漿果基地進(jìn)行，以三年生北高叢（V. corymbosum L.）越橘品種北陸（Northland）盆栽植株為試材。
1.2 試材準(zhǔn)備
本試驗(yàn)采用土培法收集根系分泌物。用400目濾網(wǎng)（長(zhǎng)×寬=30cm×20cm）做成根袋，底部扎緊。選取健壯、生長(zhǎng)勢(shì)基本一致的植株，將根系帶土坨套上根袋，栽植于裝有營(yíng)養(yǎng)土的塑料桶中（桶口直徑30cm，桶底直徑20cm，桶高22cm），常規(guī)管理。試驗(yàn)以10株為一小區(qū)，設(shè)三次重復(fù)。于栽植后的第二年取樣測(cè)定根系分泌物中的各類成分，共分6個(gè)采樣時(shí)期，即Ⅰ期（5月10日）；Ⅱ期（6月10日）；Ⅲ期（7月15日）；Ⅳ期（8月5日）；Ⅴ期（9月20日）；Ⅵ期（10月20日）。
1.3 根系分泌物的分離鑒定
從塑料桶中取出根袋，將根袋中的土壤迅速裝入自封袋內(nèi)農(nóng)業(yè)論文，放入冰桶中帶回試驗(yàn)室。將取回的土壤用3倍體積去離子水淋洗，收集土壤淋洗的水溶液作為粗提液。
1.3.1越橘根系分泌物中氨基酸的分離鑒定
將收集得到的土壤水溶液于50℃條件下孵育24h，3800r/min離心12min，取上清液，抽濾后真空減壓濃縮（50轉(zhuǎn)/min 65℃）至50ml，-4℃條件貯存。采用日立L-8800氨基酸自動(dòng)分析儀測(cè)定氨基酸的種類及含量。檢測(cè)條件：色譜柱為2622Sc（PF）；檢測(cè)波長(zhǎng)為470nm；茚三酮顯色；流量為0.35ml/min；柱體溫度為57℃；反應(yīng)溫度為130℃；流速為0.05～0.99 ml/min；檢測(cè)限為3pmol；進(jìn)樣量為60μl。數(shù)據(jù)采用NPS軟件進(jìn)行方差分析。
1.3.2越橘根系分泌物中單糖的分離鑒定
將收集得到的土壤水溶液，參照1.3.1的方法濃縮至100ml后，加無(wú)水乙醇至醇濃度為80%，4℃低溫沉降過(guò)夜，5000r/min離心10min，除去上清液，依次用無(wú)水乙醇、丙酮各洗滌2次，50℃恒溫干燥至恒重，得褐色多糖粗樣。取20mg多糖粗樣，加入濃度為1mol/L硫酸溶液20ml，于100℃水解4～6h，得到的樣品水解液用2mol/L氫氧化鈉中和至pH 7.0，并以超純水定容到5.0ml，3800r/min離心5min，取上清液待用。
利用Agilent1100 Series高效液相色譜儀分離鑒定樣品中糖份的種類，并以峰面積外標(biāo)法對(duì)樣品中的單糖組分進(jìn)行定量分析。檢測(cè)條件：色譜柱為PhenomenexC18(250mm×4.6 mm，5μm)；流動(dòng)相為溶劑A（15%(v/v)乙腈+ 20 mmol/L乙酸銨水溶液）和溶劑B（40% (v/v)乙腈+20 mmol/L乙酸銨水溶液）；梯度模式：時(shí)間梯度為0 min～25 min農(nóng)業(yè)論文，相應(yīng)濃度梯度為0%～50%溶劑B。檢測(cè)波長(zhǎng)為250 nm；流速為1.2 ml/min，進(jìn)樣量為20μl，柱溫為室溫，數(shù)據(jù)采用NPS軟件進(jìn)行方差分析。
根據(jù)1.3.2的方法，得到7種單糖組分的標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果見(jiàn)表1免費(fèi)論文。
表1 單糖的標(biāo)準(zhǔn)曲線
單糖
Chromatogram
線性方程
Regression equation
r值
r
甘露糖 Mannose
Y= 0.8643X-0.0204
0.995
鼠李糖 Rhamnose
Y= 1.4023X-0.0413
0.997
葡萄糖 Glucose
Y= 1.1348X+0.0093
0.998
半乳糖 Galactose
Y=0.5503X+0.0298
0.998
核 糖 Ribose
Y=0.6950X-0.1580
0.997
阿拉伯糖 Arabinose
Y=0.6012X-0.0178
0.993
果 糖 Fructose
第2篇
論文關(guān)鍵詞：蘋果再植病害，根際微生物，樹(shù)齡，變性梯度凝膠電泳
據(jù)統(tǒng)計(jì)，2008年我國(guó)蘋果種植面積為199.23萬(wàn)hm2，產(chǎn)量為2984.7萬(wàn)t，占世界蘋果面積和產(chǎn)量的40%以上，居世界第一位[1]。由于很多主產(chǎn)區(qū)大部分耕地都栽植了蘋果，很難在新區(qū)域發(fā)展果樹(shù)種植，蘋果再植問(wèn)題嚴(yán)重困擾著我國(guó)蘋果主產(chǎn)區(qū)果業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。以河北省為例農(nóng)業(yè)論文，本研究組在2007和2008年調(diào)查發(fā)現(xiàn)，樹(shù)齡在15年以上的蘋果園已占到近70%，而蘋果最佳的結(jié)果年齡一般不超過(guò)20年，表明果園更新?lián)Q代問(wèn)題已經(jīng)非常緊迫。蘋果樹(shù)再植?。ˋpple replant disease，ARD）又稱連作障礙或忌地現(xiàn)象，有的也叫再植障礙，得病植株表現(xiàn)為樹(shù)勢(shì)弱、葉片小、新梢細(xì)短、根系腐爛、根量減少、果實(shí)質(zhì)量差等癥狀。據(jù)報(bào)道，果樹(shù)再植病主要是由于土壤殘毒、線蟲(chóng)、土壤根際有害微生物等影響造成[2]。再植病害病因復(fù)雜，但眾多的研究報(bào)道[3~5]認(rèn)為，土壤微生物對(duì)果樹(shù)再植病害的發(fā)生發(fā)揮著重要作用[6]論文開(kāi)題報(bào)告范例。
變性梯度凝膠電泳（denaturing gradient gel electrophoresis，DGGE）最早是一項(xiàng)用于DNA突變檢測(cè)的電泳技術(shù)[7]，近些年來(lái)已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于各種環(huán)境微生物的生態(tài)研究中，如高熱溫泉、湖泊、海洋、土壤和根際等[ 8]。本文首先研究了隨著蘋果種植年限的延長(zhǎng)，其根際土壤對(duì)于后茬再植平頂海棠幼苗的株高、生物量、發(fā)病率和病原真菌數(shù)量的影響農(nóng)業(yè)論文，然后采用PCR-DGGE技術(shù)，以不同樹(shù)齡蘋果園土壤樣品中土壤微生物的基因組總DNA為研究對(duì)象，通過(guò)比較土壤中原核微生物的16S rDNA和真核微生物的18S rDNA差異，研究了隨著蘋果樹(shù)齡的增加土壤中微生物群落多樣性的變化情況。
1 材料與方法
1.1 實(shí)驗(yàn)材料：花盆（10×12 cm）；海棠品種：平頂海棠(Malus robust Rehd.)
1.2 育苗：海棠種子用1%次氯酸鈉表面消毒5分鐘，然后在自來(lái)水下沖洗5分鐘。4℃層積處理30 d以上，待種子露白后播種于滅菌的泥煤苔和珍珠巖混合基質(zhì)上，定時(shí)澆灌Hoagland營(yíng)養(yǎng)液。每6 d更換新的營(yíng)養(yǎng)液，調(diào)節(jié)pH 6.0士0.2，培養(yǎng)溫度（24士1)℃，12 h光照的培養(yǎng)室中生長(zhǎng)。
1.3 土樣采集和處理設(shè)置：土壤采集于河北省清苑縣溫仁村紅富士蘋果園，采集果園的樹(shù)齡分別為3、8、15和24年。砧木為八棱海棠（Malus micromalus Makino)，土壤類型為黃褐土。對(duì)照土采集于蘋果園附近未種植過(guò)果樹(shù)的麥田。果園土樣采集距蘋果樹(shù)干1.5 m，深10-30 cm范圍內(nèi)的根際土壤，五點(diǎn)隨機(jī)取樣農(nóng)業(yè)論文，混勻、過(guò)篩，備用。對(duì)不同樹(shù)齡果園土壤的肥力測(cè)定結(jié)果表明，土壤肥力與蘋果樹(shù)齡間沒(méi)有明顯相關(guān)性（表1）。將不同樹(shù)齡蘋果園土壤及對(duì)照土壤分裝于直徑12 cm花盆中，每盆裝土1 kg。將在培養(yǎng)室中培養(yǎng)4周的平頂海棠幼苗移栽于不同處理的花盆中。每個(gè)處理4次重復(fù)，每6株幼苗作為一個(gè)重復(fù)論文開(kāi)題報(bào)告范例。
1.4 土壤微生物總DNA提取和PCR擴(kuò)增
1.4.1 土壤微生物總DNA提取和純化
采用化學(xué)裂解法，稱取 5 g根際土壤樣品，按照化學(xué)裂解法的試驗(yàn)步驟進(jìn)行土壤微生物總DNA的提取[9]。為了避免土壤樣品所含腐殖質(zhì)雜質(zhì)對(duì)PCR擴(kuò)增反應(yīng)的抑制作用，對(duì)土壤樣品的基因組DNA粗提液進(jìn)行了純化。采用Takara公司凝膠試劑盒對(duì)5種土壤樣品的基因組DNA粗提液進(jìn)行了純化。
表1 不同處理的土壤肥力對(duì)比
Table 1 Soilfertility of different treatments
項(xiàng)目test items
對(duì)照 control
樹(shù)齡 tree age (years)
3
8
15
24
速效氮available nitrogen (mg/kg)
71
58
56
69
52
速效磷available phosphorus (mg/kg)
52
60
51
65
62
速效鉀available potassium (mg/kg)
85
78
92
88
55
有機(jī)質(zhì) organic matter (%)
1.3
1.3
2.6
2.0
1.5
鹽分 salt (%)
0.07
0.05
0.08
0.02
0.05
pH值
6.40
5.20
5.78
第3篇
關(guān)鍵詞 磺酰脲類除草劑殘留 前處理技術(shù) 發(fā)展趨勢(shì)
隨著社會(huì)進(jìn)步以及人們綠色環(huán)保理念的提高，磺酰脲類除草劑因高效、廣譜、低毒和高選擇性等特點(diǎn)，已成為當(dāng)今世界使用量最大的一類除草劑[1，2] 。自美國(guó)杜邦公司上世紀(jì)80年代開(kāi)發(fā)出第一個(gè)磺酰脲類除草劑——氯磺隆以來(lái)，磺酰脲類除草劑已有30多種產(chǎn)品問(wèn)世，常見(jiàn)的有芐嘧磺隆、甲磺隆、氯磺隆、氯嘧磺隆、胺苯磺隆、苯磺隆、醚苯磺隆等[3]。這些磺酰脲類除草劑的基本結(jié)構(gòu)由活性基團(tuán)、疏水基團(tuán)（芳基）和磺酰脲橋組成，其品種隨著活性基團(tuán)和疏水基團(tuán)的變化而變化（圖1）。
圖1 磺酰脲類除草劑的基本結(jié)構(gòu)
但是，隨著磺酰脲類除草劑使用范圍的逐步擴(kuò)大，其在農(nóng)作物和環(huán)境中的殘留以及對(duì)人類健康的危害也日益顯現(xiàn)，因此，對(duì)作物和環(huán)境中磺酰脲類除草劑殘留的檢測(cè)也提出更高的要求。目前，磺酰脲類除草劑殘留檢測(cè)技術(shù)主要集中在兩大方面：一是前處理技術(shù)研究，二是快速檢測(cè)技術(shù)研究。關(guān)于磺酰脲類除草劑殘留檢測(cè)技術(shù)研究的綜述文章較多[4～7]，從分析誤差看，前處理技術(shù)是檢測(cè)的重要環(huán)節(jié)，前處理技術(shù)既重要又薄弱，因此本文就磺酰脲類除草劑殘留的樣品前處理技術(shù)做一綜述。
隨著磺酰脲類除草劑殘留檢測(cè)技術(shù)向著簡(jiǎn)便、現(xiàn)場(chǎng)、快捷、成本低、自動(dòng)化方向發(fā)展，其前處理技術(shù)也正向著省時(shí)、省力、低廉、減少有機(jī)溶劑、減少環(huán)境污染、微型化和自動(dòng)化的方向發(fā)展。本文將磺酰脲類除草劑殘留前處理技術(shù)分為兩類：一類是傳統(tǒng)前處理技術(shù)，另一類是新型前處理技術(shù)。
1 傳統(tǒng)前處理技術(shù)
磺酰脲類除草劑殘留傳統(tǒng)前處理技術(shù)常用的有：液液萃取技術(shù)（liquid-liquid extraction，LLE）和震蕩提取技術(shù)等，這些技術(shù)在實(shí)際操作中非常實(shí)用，雖然存在一些不足：操作時(shí)間長(zhǎng)、選擇性差、提取與凈化效率低、需要使用大量有毒溶劑等，但目前在實(shí)驗(yàn)室工作中仍被廣泛使用。
1.1 液液萃取技術(shù)
液液萃取技術(shù)又稱溶劑萃取，即用不相混溶（或稍相混溶）的溶劑分離和提取液體混合物中分析組分的技術(shù)。此技術(shù)簡(jiǎn)單，不需特殊儀器設(shè)備，是最常用、最經(jīng)典的有機(jī)物提取技術(shù)，關(guān)鍵是選擇合適萃取溶劑。張淑英等[8]萃取土壤中豆磺隆選擇二氯甲烷作為萃取溶劑，平均回收率達(dá)到75.5%～97.18%。黃梅等[9]使用液液萃取技術(shù)提取稻田水體中芐嘧磺隆與甲磺隆，之后用高效液相色譜法（HPLC）進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示方法的精確度和準(zhǔn)確度較好。另外，毛楠文等[10，11]也使用此技術(shù)對(duì)磺酰脲類除草劑進(jìn)行研究。此技術(shù)不足之處是易在溶劑界面出現(xiàn)乳化現(xiàn)象，萃取物不能直接進(jìn)行HPLC、GC分析。
1.2 震蕩提取技術(shù)
震蕩提取技術(shù)也是一種常用磺酰脲類除草劑等農(nóng)藥殘留的前處理技術(shù)，包括超聲震蕩提取、儀器震蕩提取等。例如，毛楠文等[10]利用超聲震蕩等技術(shù)提取土壤中磺酰脲類和苯脲類除草劑，甲醇作為提取劑，平均加標(biāo)回收率達(dá)到71.72%～118.0%。 崔云[11]總結(jié)震蕩提取等技術(shù)提取土壤中不同種類磺酰脲類除草劑殘留，并進(jìn)行HPLC、GC等儀器分析，總結(jié)見(jiàn)表1。
2 新型前處理技術(shù)
磺酰脲類除草劑殘留的新型樣品前處理技術(shù)主要包括固相萃取技術(shù)（Solid Phase Extraction，SPE）、超臨界流體萃取技術(shù)（Supercritical Fluid Extraction， SFE）、免疫親和色譜技術(shù)（Immunoaffinity Chromatography，IAC）、分子印跡聚合物富集技術(shù)（Molecularly Imprinted Polymer， MIP）、液相微萃取技術(shù)（Liquid Phase Microextraction，LPME）、微波輔助萃取技術(shù)（Microwave-assistant Solvent Extraction， MASE）及支持性液膜（Sport Liquid Membrane， SLM）萃取技術(shù)、連續(xù)性流體液膜萃取技術(shù)（Continuous-Flow Liquid Membrane Extraction， CFLME）、離子交換膜萃取技術(shù)（Ion Exchange Membrane Extraction Method）和在線土壤柱凈化（Online Soil Column Extraction， OSCE）等其他前處理技術(shù)。其中，SPE是這些新型前處理技術(shù)使用最廣泛的一種。
2.1 固相萃取技術(shù)
SPE起始于20世紀(jì)70年代并應(yīng)用于液相色譜中，是利用固體吸附劑吸附液體樣品中目標(biāo)化合物，再利用洗脫液或加熱解吸附分離樣品基體和干擾化合物并富集目標(biāo)化合物。
SPE基本操作步驟見(jiàn)圖2。分萃取柱預(yù)處理、上樣、洗去干擾雜質(zhì)、洗脫及收集分析物4步。岳霞麗等[12]使用美國(guó)Supelco公司3mLENVI-18規(guī)格固相萃取柱測(cè)定水體中芐嘧磺隆，檢測(cè)限達(dá)到0.01mg/L。葉鳳嬌等[13]比較SupelcleanTMLC-18 SPE Tube（500mg， 3mL）和Oasis HLB SPE Tube（60mg， 3mL）2種不同規(guī)格固相萃取小柱的凈化吸附和濃縮效果，并選擇Oasis HLB SPE Tube測(cè)定12種磺酰脲類除草劑殘留。將煙嘧磺隆等12種磺酰脲類除草劑樣品用85%磷酸溶液調(diào)整pH值至2～2.5之后過(guò)柱，各組分回收率達(dá)到90%以上。在洗脫及收集分析物步驟，用含0.1mol/L甲酸的甲醇-二氯甲烷（1：9，v/v）溶液洗脫磺酰脲類除草劑，用兩次小體積洗脫代替一次大體積洗脫， 回收率更高[7]，或者用CH2Cl2可洗脫芐嘧磺隆[12]。
另外，Carabias-Maninez等[14]用SPE提取水樣中酸性磺酰脲類除草劑殘留，嘗試選擇不同吸附劑和洗脫劑，回收率70%～95%。Furlong等[15]利用SPE同時(shí)提取濃縮磺酰脲類和磺胺類農(nóng)藥殘留并用HPLC-MS進(jìn)行檢測(cè)。Galletti等[16]對(duì)LLE、SPE 2種前處理技術(shù)進(jìn)行比較，土壤和水中分離提取的綠磺隆、甲磺隆、噻磺隆、氯嘧磺隆回收率后者明顯高于后者，噻磺隆更明顯。
近年來(lái)，固相萃取在復(fù)合模式固相萃取、固相微萃?。⊿PME）、基質(zhì)分散固相萃?。∕SPD）[17，18]和新型固相萃取吸附劑4個(gè)方面展開(kāi)新應(yīng)用。
SPE前處理技術(shù)因其簡(jiǎn)單，溶劑用量少，不會(huì)發(fā)生乳化現(xiàn)象，可以凈化很小體積樣品（50～100μL），水樣萃取尤其方便，易于計(jì)算機(jī)控制而得到廣泛應(yīng)用。不足之處是提取率偏低，多數(shù)要求酸性條件。因此，對(duì)于在酸性條件下易分解的磺酰脲類除草劑殘留檢測(cè)需要及時(shí)分析或進(jìn)行酸堿平衡。
2.2 超臨界流體萃取技術(shù)
超臨界流體是物質(zhì)的一種特殊流體狀態(tài)，氣液平衡的物質(zhì)升溫升壓時(shí)，溫度和壓力達(dá)到某一點(diǎn)，氣液兩相界面消失成為一均相體系，即超臨界流體。SFE是利用超臨界流體密度大、粘度低、擴(kuò)散系數(shù)大、兼有氣體的滲透性和液體分配作用的性質(zhì)，將樣品分析物溶解并分離，同時(shí)完成萃取和分離2步操作的一種技術(shù)。超臨界流體萃取技術(shù)20世紀(jì)70年代后開(kāi)始用于工業(yè)有機(jī)化合物萃取，90年代用于色譜樣品前處理，現(xiàn)已用于磺酰脲類除草劑等農(nóng)藥樣品分析物的提取[19]。
近年來(lái)，SFE的使用已相當(dāng)廣泛。例如，史艷偉[20]采用SFE技術(shù)萃取土壤中芐嘧磺隆，不僅對(duì)SFE萃取壓力、溫度、時(shí)間等因素做具體分析，而且研究高嶺土、蒙脫石和胡敏酸含量等對(duì)芐嘧磺隆萃取率的影響。郭江峰[21]在其博士論文中用超臨界甲醇提取土壤中14C-綠磺隆結(jié)合殘留，獲得85%以上提取率。另外，Bernal等[22]利用有機(jī)溶劑、SFE和SPE 3種方法提取土壤中綠磺隆和苯磺隆。HPLC檢測(cè)顯示，SFE-CO2在綠磺隆和苯磺隆土壤殘留測(cè)定中提取更加優(yōu)越，回收率更高，達(dá)到80%～90%。Berdeaux[23]用SFE-CO2從土壤中萃取磺酰脲類除草劑綠磺隆和甲磺?。状蓟蛩鳛楦男詣厥章示笥?0%，結(jié)果與SPE技術(shù)相似或稍好。Kang等[24]用SFE技術(shù)萃取2種土壤類型中的吡嘧磺隆，以25%甲醇為改性劑，溫度80℃，壓力300atm，萃取時(shí)間30min，添加濃度0.40mg/kg，萃取率均達(dá)到99%。另外，Breglof等[25]用SFE技術(shù)與同位素跟蹤法相結(jié)合研究甲磺隆、甲嘧磺隆和煙嘧磺隆殘留，以土壤為基質(zhì)，以2%甲醇為改性劑，回收率達(dá)到75%～89%（煙嘧磺隆除外，回收率為1%～4%）。
目前常用的超臨界流體是CO2，廉價(jià)易得，化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，無(wú)毒、無(wú)味、無(wú)色，易與萃取物分離，萃取、濃縮、純化同步完成。SFE前處理技術(shù)在磺酰脲類除草劑殘留提取中克服常規(guī)提取法的缺點(diǎn)[26]，具有分離效率高、操作周期短（每個(gè)樣品從制樣到完成約40min）、傳質(zhì)速度快、溶解能力強(qiáng)、選擇性高、無(wú)環(huán)境污染等特點(diǎn)。隨著SFE技術(shù)與越來(lái)越多的快速檢測(cè)技術(shù)聯(lián)用，其在磺酰脲類除草劑殘留的研究分析中具有較大潛力，尤其在多殘留分析中，能夠顯著提高分析效率。
2.3 免疫親和色譜技術(shù)
IAC是一種將免疫反應(yīng)與色譜分析方法相結(jié)合的分析技術(shù)，是基于免疫反應(yīng)的基本原理，利用色譜的差速遷移理論，實(shí)現(xiàn)樣品分離的一種分離凈化技術(shù)。分析時(shí)把抗體固定在適當(dāng)載體上，樣品中分析組分因與吸附劑上抗體發(fā)生的抗原抗體反應(yīng)被保留在柱上，再用適當(dāng)溶劑洗脫下來(lái)，達(dá)到凈化和富集目的。特點(diǎn)是具有高度選擇性。技術(shù)關(guān)鍵是選擇合適的載體、抗體和淋洗液。例如，邵秀金[27]采用IAC和直接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法相結(jié)合對(duì)綠磺隆進(jìn)行分析檢測(cè)，選擇pH7.2磷酸緩沖液作為吸附和平衡介質(zhì)，80%甲醇作淋洗液，結(jié)果顯示：IAC動(dòng)態(tài)柱綠磺隆最高容量達(dá)到3.5μg/mL gel；樣品中綠磺隆含量250倍；空白土壤樣品添加0.1μg/g綠磺隆，平均回收率達(dá)到94.09%。另外，Ghildyal等也利用IAC結(jié)合酶聯(lián)免疫法對(duì)土壤中醚苯磺隆進(jìn)行分析檢測(cè)[28]。
2.4 分子印跡聚合體富集技術(shù)
MIP是近年來(lái)迅速發(fā)展起來(lái)的一種分子識(shí)別技術(shù)，是利用MIP特定的模板分子“空穴”來(lái)選擇性吸附聚合物，從而建立的選擇性分離或檢測(cè)技術(shù)。MIP對(duì)磺酰脲類除草劑具有很好的粘合能力。例如，Bastide[29]等用MIP富集提取綠磺隆、噻吩磺隆、氟磺隆、氯嘧磺隆、氟胺磺隆5種磺酰脲類除草劑殘留，用4-乙烯基嘧啶或2-乙烯基嘧啶作為功能單體，乙烯基乙二醇二甲基丙烯酸酯作為交鏈，甲磺隆作為模板，結(jié)果顯示MIP在極性有機(jī)溶劑中具有很好的識(shí)別能力，鍵和容量達(dá)到0.08～0.1mg/g，這種方法可以從水中富集75%以上的磺酰脲類除草劑殘留。Zhu等[30]使用MIP鍵合甲磺隆，鍵合容量高，能夠測(cè)定ng級(jí)的甲磺隆。湯凱潔等[31]采用芐嘧磺隆分子印跡固相萃取柱（MISPE）對(duì)加標(biāo)大米中的芐嘧磺隆、甲磺隆、苯磺隆和煙嘧磺隆4種磺酰脲類除草劑殘留進(jìn)行凈化和富集預(yù)處理，幾種物質(zhì)能直接被萃取柱中的印跡位點(diǎn)保留，雜質(zhì)幾乎不保留，表現(xiàn)出良好的識(shí)別性能。
2.5 液相微萃取技術(shù)
LPME是1996年Jeannot和Cantwell等提出的一種新型前處理技術(shù)[32]。LPME相當(dāng)于微型化液液萃取技術(shù)，因樣品溶液中目標(biāo)分析物用小體積萃取劑萃取而得名。例如，吳秋華[18]將LPME與HPLC聯(lián)用，分析水樣中甲磺隆、氯磺隆、芐嘧磺隆和氯嘧磺4種磺酰脲類除草劑殘留，檢測(cè)限達(dá)到0.2～0.3ng/g，并且將基質(zhì)分散固相萃取結(jié)合分散液相微萃取與HPLC聯(lián)用分析土壤中上述4種磺酰脲類除草劑，檢測(cè)限達(dá)到0.5～1.2ng/g。
2.6 微波輔助萃取技術(shù)
MASE是匈牙利學(xué)者Ganzler等提出的一種新型少溶劑樣品前處理技術(shù)。MASE利用微波能強(qiáng)化溶劑萃取效率的特性，使固體或半固體樣品中某些有機(jī)物成分與基體有效分離，并保持分析物的化合物狀態(tài)[33]。MASE萃取時(shí)間短，消耗溶劑少，具有良好選擇性，可同時(shí)進(jìn)行多樣品萃取，環(huán)保清潔，回收完全，越來(lái)越成為替代傳統(tǒng)方法的新前處理技術(shù)。但使用時(shí)應(yīng)對(duì)萃取溶劑優(yōu)化，確保萃取過(guò)程和溶劑中分析物的穩(wěn)定性[34]?，F(xiàn)階段MASE已廣泛應(yīng)用于磺酰脲類除草劑等農(nóng)藥殘留前處理中[35，36]。
2.7 其他前處理技術(shù)
有支持性液膜萃取技術(shù)、CFLME、離子交換膜萃取技術(shù)、OSCE等。支持性液膜萃取技術(shù)，又叫膜法提取，是一種以液膜為分離介質(zhì)，以濃度差為推動(dòng)力的膜分離技術(shù)，萃取的化合物范圍較窄，只能萃取形成離子的化合物，流速比較慢。例如，Nilve[37]用膜法提取測(cè)定水樣中的磺酰脲類除草劑殘留。CFLME是將LLE和SLM連接起來(lái)的一種技術(shù)，首先分析物萃取進(jìn)入有機(jī)相（LLE），然后轉(zhuǎn)入液膜支持設(shè)備形成的有機(jī)微孔液膜表面，最后通過(guò)液膜受體被捕獲（SLM）。這一技術(shù)被用來(lái)萃取水中的胺苯磺隆和甲磺隆，胺苯磺隆回收率達(dá)到88%～100%，甲磺隆達(dá)到83%～95%[38]。CFLME技術(shù)和支持性液膜萃取技術(shù)均適合在線檢測(cè)水中痕量磺酰脲類除草劑，方便快捷。不足之處是受體容量易受酸影響，而水樣和土樣中一般都有酸存在。離子交換膜萃取技術(shù)是一種采用離子交換膜作隔膜的萃取技術(shù)，通過(guò)離子交換膜（具有選擇透過(guò)性的膜狀功能高分子電解質(zhì)）的選擇透過(guò)性來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)分離物的萃取技術(shù)。離子交換膜萃取技術(shù)對(duì)生物測(cè)定有良好的評(píng)估，萃取過(guò)程成本低，能耗少，效率高，無(wú)污染、可回收有用物質(zhì)，與常規(guī)的分離萃取技術(shù)結(jié)合使用更經(jīng)濟(jì)。已在磺酰脲類除草劑殘留的檢測(cè)中得到應(yīng)用[39]。 OSCE適合土壤樣品中痕量污染物的萃取，方法有效、簡(jiǎn)單、快速。Lagana等[40]用OSCE萃取土壤中綠磺隆、芐嘧磺隆、煙嘧磺隆等6種磺酰脲類除草劑，其回收率達(dá)到63%～99%，比超聲波萃取和MASE高，精確度最好。
3 小結(jié)
目前，在磺酰脲類除草劑殘留前處理技術(shù)中，LLE和SPE仍占據(jù)重要位置，新型前處理技術(shù)并不能完全代替?zhèn)鹘y(tǒng)前處理技術(shù)，很多情況下樣品前處理過(guò)程是在常規(guī)的傳統(tǒng)前處理技術(shù)基礎(chǔ)上與微型化、自動(dòng)化、儀器化的新型前處理技術(shù)結(jié)合共同完成的。
磺酰脲類除草劑的痕量殘留及其獨(dú)特的理化性質(zhì)，給該類農(nóng)藥殘留的分析檢測(cè)造成較大困難。為確保檢測(cè)方法的靈敏性和準(zhǔn)確性，前處理過(guò)程及技術(shù)顯得尤為重要。近年來(lái)，隨著SFE、MIP、CFLME及OSCE等新型前處理技術(shù)在實(shí)際工作中的應(yīng)用和發(fā)展，儀器分析技術(shù)（如液-質(zhì)聯(lián)用、氣-質(zhì)聯(lián)用等）、免疫分析技術(shù)（如熒光免疫技術(shù)、酶聯(lián)免疫技術(shù)等）及生物傳感器法、活體檢測(cè)法、酶抑制法等磺酰脲類除草劑殘留新型檢測(cè)技術(shù)方法的不斷涌現(xiàn)和快速發(fā)展，經(jīng)濟(jì)環(huán)保、微型化、自動(dòng)化、儀器化的前處理技術(shù)及液-質(zhì)聯(lián)用等新型檢測(cè)方法的發(fā)展已成為其首選和重要發(fā)展方向，多殘留檢測(cè)、在線實(shí)時(shí)檢測(cè)、自動(dòng)化檢測(cè)等已成為國(guó)內(nèi)外共同關(guān)注的焦點(diǎn)。
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