PCR技術在食用油檢測中的可行性范文

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1結果與分析

1．118SrDNA擴增結果本試驗研究了各樣品DNA真核生物內源18SrDN段的pcr擴增，結果發現:所有食用油樣品的擴增均為陽性，空白對照為陰性(圖1)。表明已提取到檢測樣品DNA，可用于PCR檢測。

1．2雞、牛肝臟DNA的梯度PCR擴增結果本試驗通過梯度PCR研究了雞、牛源性DNA擴增的最佳退火溫度，結果發現:雞源成分的擴增，53．5℃下條帶模糊、雜帶較多表明有一些非特異性擴增，55．2℃、56．6℃、57．5℃退火溫度下條帶均集中且雜帶較少，都可以作為PCR擴增的退火溫度(圖2);牛源性成分的擴增，4個退火溫度下目的條帶的擴增效果都不錯(圖3)。故選擇較高的退火溫度(57℃)擴增雞源性DNA，選擇較高的退火溫度(55℃)擴增牛源性DNA，以使PCR擴增的特異性更強。

1．318SrDN段的擴增結果本試驗采用上述建立的PCR方法對提取的6份食用油樣品的DNA進行雞、牛源性成分檢測。由圖4、圖5可以看出陰性對照(7號條帶)未出現條帶，陽性對照(8號條帶)出現條帶，表明PCR檢測是可行的。雞源成分PCR檢測結果表明，食用油5、6的雞源成分擴增結果為陰性，食用油1～4的擴增結果為陽性，由此說明食用油1～4含雞源成分，而食用油5、6不含雞源成分。牛源成分PCR檢測結果表明，食用油4、5擴增結果為陰性，食用油1～3和食用油6擴增結果為陽性，由此說明食用油1～3和食用油6均含有牛源性成分，而食用油4和5不含有牛源成分。

2結論

試驗在成功提取到DNA的條件下，對待測的油樣首先進行真核PCR真核生物內源18SrDN段的PCR擴增，以確定已經提取到的DNA可以擴增且沒有假陽性。然后分別進行雞、牛源性成分的檢測，由結果可以看出只有食用油5中同時不含有雞、牛源性成分，而食用油1、2、3同時含有雞、牛源性成分，食用油4含有雞源性成分，食用油6含有牛源性成分。表明PCR技術在食用油中動物源性成分檢測中的應用是可行的。

提取到DNA是用PCR方法檢測油脂中動物源性成分的前提，而油脂中的DNA大部分已經破壞難以提取，Papul等認為精煉油中已沒有遺傳物質存在，而僅在粗制油中有DNA殘留，但實驗證明精煉油中遺傳物質仍然存在。試驗過程中由于個人操作等原因會導致提取效果不理想或者提取失敗，因此在已有的方法上進行不斷地探索以提高動物油脂DNA的提取率是值得再研究的課題。邵碧英等提出加入擔體共沉淀方法能保證從油脂中提取到DNA。而運用不同的DNA提取技術如核酸吸附方法，也可以提供較高質量的DNA。同時對PCR產物可以進行酶切，二重PCR進行驗證以確保結果的準確性。

作者：黃治國趙斌馮治平鄧杰劉燕梅單位：四川理工學院釀酒生物技術及應用四川省重點實驗室