玉米胚芽油食用安全性評估范文

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《食品與藥品雜志》2014年第三期

1方法

1.1小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗體重25~30g小鼠50只，雌雄各半，隨機分為5組：陰性對照組（給予花生油，15mL/kg體重），陽性對照組（給予環磷酰胺，40mg/kg體重），3個試驗組的染毒劑量分別為2.5，5.0，10.0g/kg體重。各組灌胃量均為15mL/kg體重，灌胃2次，間隔24h。末次給予受試物6h后處死小鼠，常規制片。每只小鼠鏡檢1000個嗜多染紅細胞（PCE），記錄微核細胞數，計算微核率（即微核細胞數/嗜多染紅細胞，以千分率表示）。同時觀察200個PCE，計算觀察到的正染紅細胞（NCE）數，并計算PCE/NCE比值。

1.2小鼠精子畸形試驗體重27~31g雄性小鼠25只，隨機分為5組：陰性對照組（給予花生油，15mL/kg體重），陽性對照組（給予環磷酰胺，40mg/kg體重），3個試驗組的染毒劑量分別為2.5，5.0，10.0g/kg體重。各組灌胃量均為15mL/kg體重，每天灌胃1次，連續5d。第35天處死小鼠，常規制片。每只小鼠計數1000個結構完整的精子，記錄畸變類型和數量，計算精子畸形率（以百分率表示）。

1.3大鼠30d喂養試驗體重70~90g斷乳大鼠80只，雌雄各半，隨機分為花生油陰性對照組（給予花生油，20mL/kg體重）及玉米胚芽油高、中、低劑量組（劑量分別為20，10，5mL/kg體重），各組灌胃量均為20mL/kg體重，每天灌胃1次，連續30d。觀察動物一般狀況。第30天尾靜脈取血，測血常規；此后禁食16h，腹動脈取血，進行血生化測定。同時對臟器進行病理性檢查。試驗期間觀察大鼠的一般表現、行為、中毒體征等；每周稱重1次，稱量2次食物剩余量和撒食量以計算每周食物攝入量、每周及總的食物利用率；試驗結束時所有大鼠均行大體檢查，計算肝、脾、腎、睪丸等臟器的絕對重量和臟器系數，肝、脾、腎、胃、腸、睪丸、卵巢等臟器行組織病理學檢查。

1.4統計學分析使用Excel和SPSS16.0軟件進行均數、標準差的計算和方差分析或秩和檢驗，以x±s表示。

2結果

2.1急性毒性試驗14d內小鼠未見明顯中毒癥狀、無死亡。最大耐受量（MTD）試驗結果顯示，該受試物對兩種性別小鼠的MTD均大于20.0g/kg體重。根據急性毒性分級標準，該樣品實際屬無毒級物質。

2.2遺傳毒性試驗

2.2.1Ames試驗兩次試驗受試物各劑量組回變菌落數均未超過自發回變菌落數的2倍，亦無劑量-反應關系，說明在加與不加S-9時該樣品對鼠傷寒沙門菌TA97、TA98、TA100、TA102試驗菌株均未呈現遺傳毒性。

2.2.2小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗見表1。由表1可見，受試物各劑量組微核率與陰性對照組比較差異無統計學意義（P>0.05），而環磷酰胺陽性對照組與陰性對照組相比差異有統計學意義（P<0.01）。

2.2.3小鼠精子畸形試驗見表2。由表2可見，與陰性對照組比較，受試物各劑量組小鼠精子畸形率均無統計學差異（P>0.05）；環磷酰胺陽性對照組有統計學差異（P<0.01），說明該樣品對小鼠精子無致畸形作用。

2.3大鼠30d喂養試驗大鼠喂養30d試驗周期內各試驗動物總體生長狀況良好，體重逐周增長，未見中毒體征及死亡。各試驗組動物每周體重、進食量、食物利用率和體重增重、總進食量、總食物利用率與陰性對照組比較均無統計學差異（P>0.05）。血液學測定結果顯示，與陰性對照組比較，雄性中劑量組紅細胞計數、中性細胞數、淋巴細胞數及低劑量組白細胞計數有統計學差異（P<0.01或P<0.05），但仍在本試驗正常值范圍內，尚不認為存在生物學意義。其他劑量組的各項指標與對照組比較差異均無統計學意義（P>0.05）。血液生化學測定結果顯示，與陰性對照組比較，雄性低劑量組尿素氮差異有統計學意義（P<0.05），但仍在本試驗正常值范圍，不認為存在生物學意義。其他各劑量組各指標與對照組比較差異無統計學意義（P>0.05）。試驗結束時所有動物均行大體檢查，肝臟大小正常、顏色新鮮、表面光滑、質地柔軟、邊緣銳利、無結節包塊等。取出兩側腎和腎上腺，對準腎門將腎以最大剖面剖開，暴露腎盂，皮質和髓質厚度、顏色正常，界限清晰。未見胃腸黏膜出血、潰瘍、增厚、淋巴濾泡增生等病變。脾切面馬氏小體清晰可見。睪丸/卵巢形態、大小正常。各試驗組動物的肝、腎、胃、腸、脾及卵巢/睪丸組織未見明顯異常。與陰性對照組比較，肝、脾、腎、睪丸等器官的重量和臟器系數差異均無統計學意義（P>0.05）。取高劑量組和陰性對照組雌、雄動物的肝、脾、腎、胃、腸、睪丸、卵巢等臟器進行組織病理學檢查：對照組和高劑量組動物均未觀察到胃、小腸、脾臟、睪丸、卵巢等有病理改變。少數動物可觀察到肝臟、腎臟有輕微病理學改變，但這些病理改變程度較輕且無組間特異性分布，考慮與動物質量有關，不認為試驗組出現有意義的病理學改變。

3討論

根據我國保健食品檢驗與評價規范推薦的遺傳毒性檢測試驗組合，本研究選取了急性毒性試驗、Ames試驗、小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗、小鼠精子畸形試驗、大鼠30d喂養試驗。急性毒性試驗是經口1次給予或24h內多次給予受試物，觀察動物短時間內產生的毒性反應，包括致死和非致死的參數指標。Ames試驗是目前檢測基因突變最常用的方法之一，其原理是檢測受試物誘發鼠傷寒沙門菌組氨酸缺陷型菌株回復突變成野生型的能力，許多致癌劑的生物轉化是依賴細胞內微粒體混合功能氧化酶系完成的。大鼠肝S-9是常用的體外活化系統，其主要有效成分為混合功能氧化酶系統，不加S-9混合液得到陽性結果，說明受試物是直接誘變劑，加S-9混合液得到陽性結果，說明受試物是經S-9活化后產生致突變性。微核是常用的遺傳毒理學指標之一，代表染色體或紡錘體的損傷。這種損傷會因細胞受到外界誘變因子的作用而加劇，微核產生的數量又與誘變因子劑量的強弱成正比，因此，可用微核出現的頻率評價環境誘變因子對生物遺傳物質的損傷。小鼠精子形態受基因控制，精子畸形是決定精子形成的基因發生突變的結果。因此，形態改變提示有關基因及其蛋白質產物的改變。大鼠30d喂養試驗主要觀察較長期飼喂不同劑量的受試物引起有害效應的劑量、毒作用性質和靶器官，估計亞慢性攝入的危害。當未觀察到有害作用的最大劑量達到人可能攝入量的一定倍數時，則可以此為依據外推到人，為確定人食用的安全劑量提供依據。本研究結果顯示，接受急性毒性試驗的14d內小鼠未見明顯中毒癥狀、無死亡，且兩種性別小鼠對玉米胚芽油的最大耐受量均大于20.0g/kg體重。根據急性毒性分級標準，該樣品屬無毒級物質。Ames試驗、小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗、小鼠精子畸形試驗結果顯示，玉米胚芽油對小鼠沒有致畸、致突等遺傳毒性作用。大鼠30d喂養試驗結果顯示，試驗期內各試驗組動物生長發育良好，體重增重、食物利用率、臟器重量和臟器系數等各項指標均在本試驗正常值范圍。試驗組血常規及血生化各指標均在本試驗正常值范圍。病理組織學檢查試驗組被檢臟器未見有意義的病理學改變。毒理學評價結果認為該玉米胚芽油是安全的。

作者：馮文娟許美艷石勱李峰盧連華單位：山東省五蓮縣疾病預防控制中心 航天中心醫院 中日友好醫院山東西王食品有限公司山東省疾病預防控制中心