黃芪多糖對活疫苗免疫的影響范文

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《畜牧與獸醫雜志》2014年第六期

1材料與方法

1.1外周血淋巴細胞增殖的測定MTT法。將抗凝血用Hanks’液稀釋1倍，小心加在淋巴細胞分離液上層，2000r/min離心20min，吸取中間云霧狀白細胞層，用無血清RPMI1640營養液洗2遍，1500r/min離心10min。活細胞計數后，RPMI1640培養液調整細胞濃度為5×106個/mL，加入到96孔細胞培養板中，80μL/孔，每孔再加20μLConA作為刺激原，每個樣品重復4孔，同時設細胞調零孔對照，然后置于37℃、5%CO2條件下培養44h，取出每孔加MTT20μL，繼續培養4h后，吸去上清液，每孔加DMSO100μL，將細胞板置于微量震蕩器上震蕩5min使沉淀完全溶解，用酶聯免疫儀上在570nm處檢測其吸光度(A570值)，作為T淋巴細胞增殖的指標。

1.2血清抗體效價測定β－微量法。在96孔微量血凝板上，先每孔加50μLPBS液，然后每排的第1孔加入50μL待檢血清，依次倍比稀釋至第11孔，每孔加入50μL4單位新城疫抗原和50μL1%雞紅細胞懸液，震蕩混勻后置37℃溫箱中感作30min。同時設陽性血清、陰性血清及空白對照孔。紅細胞沉淀時觀察，以100%抑制凝集的血清最大稀釋度為該血清的HI抗體效價。1.5數據分析數據以Means±SD表示，用SPSS軟件進行Duncan''''s多重分析。

2結果

2.1淋巴細胞增殖試驗在D7和D14，各APS組和專用稀釋液組的A570值顯著高于對照組，0.5%APS組顯著高于0.25%APS組和專用稀釋液組(P＜0.05);在D21，各APS組和專用稀釋液組的A570值顯著高于對照組，0.5%APS組顯著高于其他APS組和專用稀釋液組(P＜0.05)。見表1。

2.2血清抗體的變化在D7、D14和D21，0.5%APS組的血清特異性抗體顯著高于0.25%APS組和專用稀釋液組(P＜0.05)，0.5%APS組與1%APS組的血清特異性抗體差異不顯著(P＞0.05)。見表2。

2.3血清IL－2的變化在D7和D21，0.5%APS組的血清IL－2含量顯著高于0.25%APS組和專用稀釋液組(P＜0.05)，0.5%APS組與1%APS組含量差異不顯著(P＞•102•AnimalHusbandry＆VeterinaryMedicine2014Vol.46No.60.05);在D14，0.5%APS組的血清IL－2含量顯著高于0.25%APS組、1%APS組和專用稀釋液組(P＜0.05)。見表3。

3討論

目前市場上的疫苗稀釋液產品較多，但大多數產品的主要成分僅為緩沖劑和染色指示劑，不能很好地保護疫苗中的抗原活性，使畜禽在免疫接種過程中抗原活性損失過快，甚至導致免疫失敗。本研究采用黃芪多糖作為新城疫疫苗稀釋劑取得了較好的免疫效果。抗感染免疫是動物機體抵抗病原體感染的能力，特異性免疫(疫苗接種)在消除病原體作用中占重要的地位。特異性免疫包括體液免疫和細胞免疫，其中體液免疫的抗感染作用是通過抗體來實現的，抗體在體內可發揮中和作用、對病原微生物生長的抑制作用、抑制病原體黏附細胞的作用、免疫溶解作用、免疫調理作用、抗體依賴性細胞介導的細胞毒作用。

淋巴細胞增殖及其分泌細胞因子含量是反映細胞免疫的指標之一。T細胞的功能與機體的抗病能力有相關性，能促進白介素和干擾素等細胞因子的生成，輔助B細胞的抗體生成;IL－2主要由TH1型細胞分泌產生，可以輔助CTL細胞表達殺傷功能。本試驗結果顯示，黃芪多糖疫苗稀釋液組在免疫后各時間點的淋巴細胞增殖、IL－2含量均高于專用疫苗稀釋液組，表明黃芪多糖有較強增強細胞免疫的作用，這與APS用于豬瘟活疫苗稀釋液提高細胞免疫的研究結果是一致。也有研究證明APS對IL－2、IFN－γ和TNF－α的mRNA表達有顯著增強作用，APS能促進脾淋巴細胞Th1型細胞因子mRNA表達來整體調節促進細胞免疫。

機體的免疫狀態可以由體液免疫和細胞免疫的狀態來反映。抗體效價的高低直接反映機體的體液免疫狀態，在本試驗中，0.5%APS組的血清特異性抗體顯著高于0.25%APS組和專用稀釋液組。施志玉等在研究黃芪多糖及其硫酸化產物對雛雞免疫法氏囊疫苗的影響時發現，與對照組比較，黃芪多糖可以顯著提高法氏囊疫苗的血清特異性抗體效價。本試驗中，APS三個組的疫苗佐劑活性與其劑量存在一定的量效關系，0.5%劑量的APS疫苗稀釋液的疫苗增強作用多顯著高于0.25%劑量組，但1%劑量組多與0.5%劑量間差異不顯著或弱低于后者，該研究結論與鄭鐵鎖等的報道相符，中藥的增強免疫作用發揮最佳的效果不是劑量越高則越好，而是在一個合適的劑量范圍內。綜合評價，0.5%APS作為疫苗稀釋液的疫苗佐劑活性最好，但具體機理還需進一步研究。

作者：杜立中馬霞劉永錄張國祖單位：河南省九安牧業有限公司河南牧業經濟學院藥物工程系