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摘要:現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中,內(nèi)窺鏡技術(shù)已經(jīng)被廣泛普及。通過內(nèi)窺鏡技術(shù)對活組織進(jìn)行取材做病理檢查,成為廣大醫(yī)生做出正確診斷的重要參照,而病理內(nèi)窺鏡標(biāo)本制片技術(shù)正是診斷的重要基礎(chǔ)。
病理內(nèi)窺鏡標(biāo)本一般包括胃鏡、腸鏡標(biāo)本,喉鏡、氣管鏡標(biāo)本及膀胱鏡標(biāo)本。這類活檢組織標(biāo)本較小,使用常規(guī)石蠟制片技術(shù),需要3~4天完成制片,在病人急需手術(shù)或治療時(shí),常因等待病理報(bào)告時(shí)間過長而耽誤臨床診治工作。為此,我們將微波技術(shù)應(yīng)用于內(nèi)窺鏡標(biāo)本的制片中,只需1~2小時(shí)就完成制片,極大提高了工作效率,且制片質(zhì)量近似于常規(guī)石蠟制片技術(shù),完全符合病理診斷的要求。
1材料與方法
1.1材料選取內(nèi)窺鏡活檢標(biāo)本100例,其中胃鏡標(biāo)本40例,腸鏡標(biāo)本40例,喉鏡標(biāo)本20例。要求組織塊小米粒大小,便于固定脫水。
1.2儀器設(shè)備三星STG88型微波爐一臺。輸出功率800W,分六級調(diào)節(jié)(800W、600W、450W、300W、180W、100W)。
1.3所用藥液①固定液:95%乙醇,無水乙醇。②透明液:按質(zhì)量比3:1配制的硬脂酸-石蠟液態(tài)混合物。③Harris蘇木精染液。
1.4微波制片①將組織放入盛有5ml95%乙醇的青霉素小瓶內(nèi),用兩層紗布及布繩將瓶口封好,用450W功率微波輻射30秒,至乙醇沸騰。②取出小瓶,將剩余液體倒掉,換成5ml無水乙醇,用450W功率微波輻射30秒。③倒去無水乙醇剩余液體,用硬脂酸-石蠟液態(tài)混合物透明,用450W功率微波輻射4~5分鐘。④用熔點(diǎn)為56~58℃的液態(tài)純石蠟浸蠟,450W微波輻射5分鐘。⑤組織包埋、切片:包埋時(shí)盡量用最小的模具,把所有組織包在一個(gè)平面上,切片時(shí)待多個(gè)組織充分暴露時(shí)再切,爭取選擇多個(gè)切面,切片厚4~5μm。⑥用微波烤片:450W微波輻射3分鐘。
1.5微波HE染色①切片常規(guī)方法脫蠟、脫苯、水洗,經(jīng)微波烤片后,脫蠟時(shí)間減少至5分鐘,脫苯時(shí)間也相應(yīng)減少,水洗時(shí)間正常。②吸Harris蘇木精染液3~4滴滴于切片上,完全覆蓋組織,用600W微波輻射30秒,水洗。③1%鹽酸酒精分化1~3秒,碳酸鋰飽和溶液藍(lán)化至切片泛藍(lán)后水洗1分鐘。④伊紅染色,梯度酒精脫色,中性樹膠封片,鏡下觀察。
2討論
微波,通常稱為“超高頻電磁波”,是一種具有能量的電磁波,它具有波長短、頻率高的特點(diǎn),可使物體內(nèi)部的極性分子以每秒24億次的速度運(yùn)動,而在該運(yùn)動中產(chǎn)生的瞬間熱,卻能使組織的抗原性保持不變。將微波輻射技術(shù)應(yīng)用于病理內(nèi)窺鏡標(biāo)本的快速制片中,其基本原理是組織與固定液、切片與染色液,在高頻電磁場中,各種分子劇烈振動、相互摩擦、碰撞,極大地加速了固定、脫水和染色的速度,而組織結(jié)構(gòu)及細(xì)胞形態(tài)保持完整。其用于透明的硬脂酸-石蠟混合液是一種比較溫和的透明劑,能有效緩解因快速加溫而造成的標(biāo)本變硬皺縮的副作用。
在制片過程中使用微波,試劑與組織塊中的液體交換加快,而染色液更快的進(jìn)入了組織細(xì)胞間隙內(nèi),從而縮短了制片時(shí)間。光鏡下觀察,組織層次結(jié)構(gòu)清楚,細(xì)胞形態(tài)完整,組織細(xì)胞染色艷麗醒目,紅藍(lán)適度,透明潔凈,胞漿胞核對比清晰,完全符合閱片的需要。
在操作中應(yīng)注意以下幾點(diǎn):①加溫時(shí)用燒杯盛250ml清水放于微波轉(zhuǎn)盤上,用于調(diào)節(jié)爐內(nèi)溫度,以免高溫破壞組織或發(fā)生危險(xiǎn)。②使用微波時(shí),必須將盛放固定液的小瓶封好,以免固定液沸騰時(shí)將組織濺出。③石蠟可在60℃恒溫箱中事先備好待用,以縮短操作時(shí)間。