白血病合并感染時(shí)硫化氫與炎癥研究范文
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《海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)》2016年第4期
摘要：
目的：探討硫化氫在急性早幼粒細(xì)胞白血病合并感染時(shí)的臨床作用。方法：挑選APL合并感染住院病例30例為實(shí)驗(yàn)組，APL不合并感染住院病例26例為對(duì)照組；測(cè)定實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組血中的H2S、C-反應(yīng)蛋白（CRP）、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)和白介素-10(IL-10)水平，比較以上指標(biāo)在兩組之間有無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)果：實(shí)驗(yàn)組血中的H2S、CRP、TNF-α和IL-1β水平明顯升高，IL-10水平下降，與對(duì)照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；實(shí)驗(yàn)組經(jīng)治療感染控制后患者血漿中的H2S、CRP、TNF-α和IL-1β水平明顯下降，IL-10水平上升，與感染治療前相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；與對(duì)照組相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；實(shí)驗(yàn)組H2S與CRP、TNF-α和IL-1β呈正相關(guān)（r=0.506，r=0.609，r=0.583，P<0.01），H2S與IL-10呈負(fù)相關(guān)（r=‐0.561，P<0.01）。結(jié)論：內(nèi)源性H2S參與了APL合并感染時(shí)炎癥的的病理生理過程，其作用可能與CRP、TNF-α、IL-1β的作用類似，與IL-10的作用相反，是促炎作用。
關(guān)鍵詞：
近幾年來，氣體信號(hào)分子H2S已在生命科學(xué)和醫(yī)學(xué)科學(xué)領(lǐng)域成了廣大學(xué)者關(guān)注和研究的熱點(diǎn)。目前的研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)H2S在人體具有重要的生理和病理生理調(diào)節(jié)作用，并與許多臨床疾病的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)歸有著密切的關(guān)系［1-6］。我們的研究發(fā)現(xiàn)，H2S參與了急性早幼粒細(xì)胞白血病（acuteleukemia，APL）的病理生理過程，為了進(jìn)一步研究H2S在急性早幼粒細(xì)胞白血病合并感染時(shí)與炎癥的關(guān)系，我們?cè)O(shè)計(jì)了本實(shí)驗(yàn)，研究H2S在APL合并感染過程中的作用及意義。
1對(duì)象與方法
1．1病例選擇及一般資料
2014－01－01－2015－5－31河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院醫(yī)院初治ApL住院病例56例。其中ApL合并感染者30例為實(shí)驗(yàn)組，男13例，女17例，年齡19～56歲，中位年齡37歲。ApL不合并感染者26例為對(duì)照組，男12例，女14例，年齡21～53歲，中位年齡34歲，上述所有病例均排除心腦肺等主要臟器疾病，本病的診斷及療效判斷均符合《血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》［7］。
1．2方法
1．2．1標(biāo)本采集
病例組和對(duì)照組均在早晨抽取空腹靜脈血2mL至EDTA-K2抗凝管，3000rpm離心10min后，吸血漿至EP管，置于-75℃低溫冰箱，用于待測(cè)定H2S濃度。病例組經(jīng)抗感染治療后再抽血復(fù)查。對(duì)照組的血漿采集、處理方法與病例組一樣。
1．2．2H2S測(cè)定方法
測(cè)定前將血清標(biāo)本室溫復(fù)融，3000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘，取上清液檢測(cè)。采用去蛋白的方法[6]。首先用不同濃度的NaHS標(biāo)準(zhǔn)液繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其直線回歸方程為：Y=1513.1X+2.362，r2=0.998。反應(yīng)在5ml玻璃試管中完成，按序加入以下試劑：首先在玻璃試管中加入10g/L醋酸鋅0.5ml，然后加入血漿標(biāo)本0.1ml，振蕩搖勻，再依次加入20mmol/L對(duì)苯二胺鹽酸鹽0.5ml和30mmol/L三氯化鐵0.5ml，在室溫孵育20分鐘使其充分反應(yīng)，再加入lml10%三氯醋酸使蛋白沉淀下來，最后加入2.5ml蒸餾水補(bǔ)足體積至5ml，再次充分混勻，離心機(jī)中6000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘，吸出上清液，用722分光光度計(jì)在670nm波長(zhǎng)處測(cè)其吸光度，根據(jù)繪好的H2S標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出上清液中H2S的含量，單位:μmol/L。血清CRP、TNF-α、IL-1β和IL-10水平測(cè)定，采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)法,試劑盒試劑盒購自南京建成生物工程研究所。操作嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行,用酶標(biāo)儀(LECANSafireAutira)在490nm處讀取OD值。以上試劑盒操作步驟嚴(yán)格無菌操作。
1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
計(jì)量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（mean±SD）表示。應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，方差齊（P＞0.10）的資料多組間比較采用單因素方差分析、兩組間比較用兩樣本均數(shù)t檢驗(yàn)，以P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2結(jié)果
2.1H2S、CRP、TNF-α、IL-1β和IL-10水平在各組的比較
實(shí)驗(yàn)組血中的H2S、CRP、TNF-α和IL-1β水平明顯升高，IL-10水平下降，與對(duì)照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；實(shí)驗(yàn)組經(jīng)治療感染控制后患者血漿中的H2S、CRP、TNF-α和IL-1β水平明顯下降，IL-10水平上升，與感染治療前相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；與對(duì)照組相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見附表。
2.2H2S、CRP、TNF-α、IL-1β和IL-10的相關(guān)性分析
實(shí)驗(yàn)組關(guān)聯(lián)性分析表明，H2S與CRP、TNF-α和IL-1β呈正相關(guān)（r=0.506，r=0.609，r=0.583，P<0.01），H2S與IL-10呈負(fù)相關(guān)（r=‐0.561，P<0.01），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
3討論
過去人們一直認(rèn)為H2S只是一種毒性氣體，并且一直研究和關(guān)注的是它對(duì)機(jī)體的毒害作用，近年卻發(fā)現(xiàn)人和動(dòng)物體內(nèi)也有內(nèi)源性H2S的產(chǎn)生，并且它還是目前人類發(fā)現(xiàn)的第三個(gè)氣體信使分子。它在體內(nèi)由同型半胱氨酸、蛋氨酸、半胱氨酸等含硫的氨基酸被磷酸吡多醛-5’-磷酸依賴性酶（包括CBS、CSE）、半胱氨酸轉(zhuǎn)移酶等催化產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物。研究結(jié)果表明內(nèi)源性H2S參與了感染及多種癌癥的病理生理過程。我們的前期研究發(fā)現(xiàn)，H2S參與了急性早幼粒細(xì)胞白血病的病理生理過程，為了進(jìn)一步研究H2S在急性早幼粒細(xì)胞白血病合并感染時(shí)與炎癥的關(guān)系，我們?cè)O(shè)計(jì)了此實(shí)驗(yàn)。本研究發(fā)現(xiàn)在急性早幼粒細(xì)胞白血病合并感染時(shí)，血漿中的H2S濃度明顯升高，經(jīng)抗感染治療后H2S濃度回降至接近對(duì)照組，說明內(nèi)源性硫化氫參與了急性早幼粒細(xì)胞白血病合并感染時(shí)炎癥發(fā)生發(fā)展的病理生理過程，為了進(jìn)一步探索H2S在這一過程中是促炎作用還是抑炎作用，我們同時(shí)測(cè)定了幾個(gè)常見的炎癥因子，包括CRP、TNF-α、IL-1β和IL-10，結(jié)果我們發(fā)現(xiàn)H2S濃度的變化與促炎因子CRP、TNF-α和IL-1β的變化趨勢(shì)一致，呈正相關(guān)，與抑炎因子IL-10的變化趨勢(shì)相反，呈負(fù)相關(guān)。因此，我們推測(cè)在急性早幼粒細(xì)胞白血病合并感染時(shí)硫化氫的作用可能與促炎因子CRP、TNF-α和IL-1β是一樣的，促進(jìn)了炎癥的發(fā)展，至于H2S通過何種通路促進(jìn)了炎癥的發(fā)展，需要進(jìn)一步設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)去探索。H2S對(duì)炎癥的作用，付蘭英的等對(duì)胰腺炎的研究顯示，高濃度的硫化氫能夠抑制IL-10的表達(dá)，增加TNF-α、IL-1β的表達(dá)，促進(jìn)體外胰腺炎模型的發(fā)展［8］。這與我們的研究結(jié)果相一致，我們猜測(cè)，在急性早幼粒細(xì)胞白血病合并感染時(shí)硫化氫的可能通過升高促炎因子CRP、TNF-α和IL-1β的表達(dá)，抑制IL-10的表達(dá)，促進(jìn)了炎癥的發(fā)展。CRP是一種急性時(shí)相反應(yīng)蛋白,是由肝臟合成的，在炎癥反應(yīng)及組織損傷時(shí)CRP會(huì)顯著增高［9-10］。TNF-α是一種有著重要作用的免疫調(diào)節(jié)因子，具有促炎、抗腫瘤與自身免疫調(diào)節(jié)作用，主要由活化的巨噬細(xì)胞，NK細(xì)胞及T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生。IL-1β在免疫調(diào)節(jié)及炎癥進(jìn)程中扮演著重要的角色，主要由活化的單核－巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，主要通過調(diào)節(jié)自身免疫病和炎癥相關(guān)基因的表達(dá)，誘導(dǎo)干擾素γ、磷脂酶A2、黏附分子、一氧化氮合酶、環(huán)氧化酶2等效應(yīng)蛋白的表達(dá)。IL-10能夠抑制前炎癥細(xì)胞因子等細(xì)胞因子，主要Th2細(xì)胞和單核巨噬細(xì)胞產(chǎn)生[11]。總之，通過我們的研究，探討了H2S在急性早幼粒細(xì)胞白血病合并感染時(shí)與炎癥的關(guān)系，為闡明H2S在急性早幼粒細(xì)胞白血病合并感染時(shí)的病例生理作用奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
參考文獻(xiàn):
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10.胡銀娥,代淑芳,劉揚(yáng).超敏C反應(yīng)蛋白、內(nèi)皮抑素在糖尿病肢端壞疽早期病變中的診斷意義[J].中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志,2016,26(18):39-40
作者:范凌 陳立鋒 范靜 張靈 郭力榮 單位:河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院血液內(nèi)科 河北北方學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生理教研室 河北張家口市第六醫(yī)院婦產(chǎn)科 河北張家口市第一醫(yī)院腎內(nèi)科和血液內(nèi)科
