頭頸部神經內分泌癌中缺氧因子分析范文

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【摘要】目的分析缺氧相關因子Glut-1與HIF-1α及p-Akt在頭頸部神經內分泌癌中表達影響。方法回顧性分析接受治療的頭頸部神經內分泌癌活檢或手術標本66例，選取同期接受治療60例聲帶息肉患者作為對照組，免疫組織化學法分析PI3K、Glut-1、p-Akt及HIF-1α在癌癥和聲帶息肉內表達情況，單因素和多因素分析影響患者生存率因素。結果頭頸部神經內分泌癌中Glut-1陽性表達率為81．82%(54/66)，聲帶息肉組織共陽性表達率為6．67%(4/60);HIF-1α表達率為54．44%(36/66)，聲帶息肉表達率為0;PI3K陽性表達率為45．45%(30/66)，聲帶息肉表達率為0;p-Akt表達率為36．36%(24/66)，聲帶息肉表達率為0，差異均有統計學意義(χ2=10．984、9．387、12．063、11．338，P＜0．05);66例頭頸部神經內分泌癌患者3年生存率36．36%，單因素分析顯示是否出現淋巴結轉移與遠處轉移患者間生存率對比差異有統計學意義(P＜0．05)。結論頭頸部神經內分泌癌患者PI3K、Glut-1、p-Akt及HIF-1α表現為高表達，其生存情況和發(fā)生遠處轉移有聯系。

【關鍵詞】頭頸部神經內分泌癌;缺氧因子;表達情況;生存率

頭頸部內分泌癌在臨床中不常見，屬于頭頸部惡性腫瘤，患者在早期易發(fā)生轉移且死亡率比較高，影響患者預后因素尚不完全清楚，當前臨床對其治療還沒有統一標準，所以，尋找新的療法使頭頸部神經內分泌癌療效提升就變得非常迫切［1-2］。伴隨著分子生物學與免疫學等不斷發(fā)展，多數學者一致認為腫瘤轉移與浸潤為多步驟、多因素發(fā)展進程，而相關基因表達為其中重要機制之一。頭頸部神經內分泌癌患者機體內腫瘤組織生長較快，能量代謝變強，葡萄糖攝入量明顯增大，同時會造成患者出現腫瘤內缺氧微環(huán)境。葡萄糖轉運蛋白1(Glut-1)參加到腫瘤細胞能量代謝過程中，相關研究顯示許多惡性腫瘤內Glut-1出現異常表達。另外，研究表明腫瘤細胞在缺氧狀況下基因表達與轉錄中HIF-1α都重要影響，在腫瘤組織代謝中，Glut-1是HIF-1α下游基因會受到調控，并且PI3K和p-AKT所啟動PI3K/AKT信號通路可調控HIF-1α與Glut-1表達［3-4］。因此，本文通過分析Glut-1與HIF-1α及p-Akt在頭頸部神經內分泌癌中表達影響，為臨床患者治療提供一些實驗室依據。

1材料與方法

1．1一般資料回顧性分析

2011年6月至2014年6月間在本院接受治療的頭頸部神經內分泌癌活檢或手術標本66例，其中男性48例，女性18例，平均年齡(60．7±8．4)歲，6例為鼻神經內分泌癌(左側鼻腔2例，右側鼻腔4例)、12例為鼻竇神經內分泌癌(5例右側鼻竇，7例左側鼻竇)、42例為喉神經內分泌癌(喉聲門下14例，聲門上28例)、6例為口咽神經內分泌癌(1例左側扁桃體，5例右側扁桃體)，其中出現遠處轉移12例，淋巴結轉移18例。選取同期在本院接受治療60例聲帶息肉患者作為對照組，其中男性34例，女性26例，平均年齡(55．8±8．6)歲。

1．2主要試劑

兔抗人Glut-1多克隆抗體、鼠抗人HIF-1α單抗、兔抗人p-Akt多克隆抗體及兔抗人PI3K-p85亞單位多克隆抗體(均由上海賽默飛世爾公司生產)。

1．3試驗方法免疫組織化學法:

標本使用10%中性福爾馬林液進行規(guī)定，石蠟包埋后4μm切片;脫蠟水化并使用PBS緩沖液3次沖洗，高壓高溫下抗原修復，切片內加入3%過氧化氫，孵育15min將內源性過氧化物酶阻斷，分別加入Glut-1抗體、HIF-1α抗體、p-Akt抗體及PI3K-p85抗體，PBS溶液沖洗3～5min后每個切片加入聚合物增強劑45μl，PBS溶液沖洗3min后切片加入酶標抗兔或鼠聚合物45μl，孵育35min;PBS沖洗后切片加入AEC或者DAB顯色液90μl，陽性表現為紅色或者棕色;蘇木精復染，PBS溶液返藍，水洗，最后蘇木精淡染、脫水及封固。空白對照:PBS代替一抗為陰性對照;陽性對照:紅細胞染色當做Glut-1陽性對照;光鏡下，Glut-1抗體胞質或者胞核為不同程度棕黃色，p-Akt、PI3K及HIF-α陽性細胞的染色都在細胞質與細胞膜上，表現為均勻棕黃色顆粒。切片隨機察看10個高倍視野，每個視野下記錄100個腫瘤細胞。若陽性細胞比率≥25%是陽性，若陽性細胞比率＜25%是陰性。患者隨訪3年，隨訪截止2017年6月。

1．4統計學分析

應用SPSS19．0統計軟件進行數據分析，計量資料(x珋±s)表示，計數資料比率(%)表示，χ2檢驗，患者生存率進行Logistic回歸分析，P＜0．05差異有統計學意義。

2結果

2．1患者p-Akt、Glut-1、PI3K及HIF-1α表達情況

在頭頸部神經內分泌癌內Glut-1陽性表達率為81．82%(54/66)，聲帶息肉組織其陽性表達率為6．67(4/60)，HIF-1α表達率為54．44%(36/66)，聲帶息肉其表達率為0%，PI3K陽性表達率為45．45%(30/66)，聲帶息肉其表達率為0，p-Akt表達率為36．36%(24/66)，聲帶息肉其表達率為0%，差異均有統計學意義(χ2=10．984、9．387、12．063、11．338，P＜0．05)。

2．2患者生存率狀況單因素分析

66例頭頸部神經內分泌癌患者3年生存率36．36%，單因素分析顯示是否出現淋巴結轉移與遠處轉移患者間生存率對比差異有統計學意義(P＜0．05)，見表1。

2．3影響患者生存率Logistic回歸分析

Logistic回歸分析顯示:遠處轉移為影響患者生存率獨立危險因素，見表2。

3討論

瘤細胞發(fā)生轉移、增殖、生化和分化等需消耗大量的能量，進而使糖酵解量升高，腫瘤細胞生化特征之一為葡萄糖攝取量增大［5-6］。Glut為介導細胞攝取葡萄糖主要載體，當前發(fā)現Glut蛋白已有14余種，Glut-1對葡萄糖親和力較高［7］。相關研究顯示腫瘤細胞對攝取葡萄糖升高和患者機體Glut-1表達升高有緊密聯系，在腎癌、乳腺癌、甲狀腺癌、肺癌、胃癌、肝癌和直腸癌等腫瘤組織內其表達比其他正常組織顯著升高［8-10］。頭頸部神經內分泌癌同樣有無限轉移、增殖、侵襲與生長特性，其發(fā)生與進展也需大量營養(yǎng)與能量，進而對Glut-1表達刺激增大［11-12］。本文研究顯示癌癥患者機體內Glut-1陽性表達率是81．82%，和聲帶息肉對比差異有統計學意義，說明Glut-1在腫瘤發(fā)生與進展中有重要影響，可當做頭頸部神經內分泌癌檢測標志物之一。HIF-1為HIF-1β亞基于HIF-1α亞基組成異源二聚體，HIF-α亞基為功能性亞基，細胞內氧濃度對其表達有調控作用。缺氧條件下，HIF-1α表達升高，可上調細胞增殖，將乏氧反應性因基因表達激活［13-15］。患者機體內腫瘤細胞無限增大會造成細胞供氧不充足，形成癌組織乏氧微環(huán)境，致使機體HIF-1α表達升高。國內外相關研究顯示，在前列腺癌、結腸癌、胰腺癌、乳腺癌和肺癌等腫瘤內HIF-1α都為陽性表達，在癌前病變組織內也存在HIF-1，正常組織內則沒有表達，本文研究和相關研究一致。AKT還可稱作蛋白激酶B，是細胞信號轉導路徑上原癌基因。它作為信號蛋白分子，參加磷脂酞肌醇3激酶的信號傳導中心環(huán)節(jié)。PI3K-AKT信號路徑可控制腫瘤發(fā)生進展內細胞的生物學進展，包含細胞遷移、轉錄、調控細胞周期、翻譯、增殖、代謝、細胞凋亡和新生血管等，PI3K活化可使AKT磷酸化產生p-AKT，p-AKT能將下游色氨酸殘基與絡氨酸磷酸化，使下游因子激活，進而發(fā)揮加速生成腫瘤血管、抑制細胞凋亡、加速細胞侵襲、增殖、運動與生長等作用［16-18］。本文研究顯示頭頸部神經內分泌癌患者機體內PI3K陽性表達率為45．45%，p-Akt表達率為36．36%和聲帶息肉表達率差異有統計學意義，說明PI3K-AKT信號路徑在患者疾病進展有一定影響。對患者三年生存率研究顯示，僅轉移對其生存狀況有顯著影響。綜上所述，頭頸部神經內分泌癌患者PI3K、Glut-1、p-Akt及HIF-1α表現為高表達，其生存情況和發(fā)生遠處轉移有聯系。

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作者：張燃 張金立 單位：遼寧省錦州市中心醫(yī)院